淡豆豉6種黃酮類(lèi)成分質(zhì)量控制研究

淡豆豉是以豆科植物大豆為主料，以桑葉、青蒿為輔料經(jīng)過(guò)發(fā)酵加工而 成的制品。性苦、辛，涼。歸肺、胃經(jīng)。中醫(yī)理論認(rèn) 為淡豆豉具有解表，除煩，宣發(fā)郁熱的功效，可用于感冒，寒熱頭痛，煩躁胸悶，虛煩不眠的癥狀。淡 豆豉主要活性成分為黃酮、皂苷、蛋白、多糖、氨基 酸、纖溶酶和揮發(fā)性等化合物。其中，黃酮類(lèi)成 分中的大豆苷具有明顯的抗骨質(zhì)疏松作用，黃豆黃苷具有較高的 α－葡萄糖苷酶抑制活性，染料木 苷具有抗腫瘤和抗氧化活性，大豆苷元具有顯著 的抗菌活性和降血糖作用，黃豆黃素具有促成 骨細(xì)胞增殖和抗氧化能力，染料木素也具有明顯 抗腫瘤、抗氧化、降血脂、抗肝纖維化和改善更年期 癥狀等藥理活性。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

1260 型高效液相色譜儀( 美國(guó) Angilent 公司) ; CPA225D 型十萬(wàn)分之一分析天平( 德國(guó) Sartorius 公司) ; KQ－500E 臺(tái)式超聲波清洗器( 昆山市 超聲 儀 器 有 限 公 司) ; Milli － Q 超 純 水 儀 ( 美 國(guó) Millipore 公司) 。

1． 2 試 藥

對(duì) 照 品 大 豆 苷 ( 批 號(hào): MUST － 16031507) 、黃豆黃苷( 批號(hào): MUST－ 17032503) ，染 料木苷( 批號(hào): MUST－16021802) 、大豆苷元( 批號(hào): MUST － 17101202 ) 、黃 豆 黃 素 ( 批 號(hào): MUST － 17092210) 、染料木素( 批號(hào): MUST－15090908) 均購(gòu) 自成都曼思特生物科技有限公司，以上標(biāo)準(zhǔn)品純度 均大于 98%。淡豆豉樣品( 編號(hào)為 S1 ～ S13) 和淡豆 豉原料黑豆( 編號(hào)為 S14) 分別在市場(chǎng)和企業(yè)中收 集，S1～ S14 信息詳見(jiàn)表 1。甲醇、乙腈為色譜純( 德 國(guó) Merck 公司) ; 甲酸為色譜純( 上海阿拉丁試劑有 限公司) ，其余試劑均為分析純。


2 方法與結(jié)果

采用 Phenomenex Luna C18色譜柱 ( 4．6 mm×250 mm，5 μm) ，流動(dòng)相甲醇( A) －0．1%甲酸水溶液( B) ，梯度洗脫( 0～ 5 min，5% ～ 5% A; 5 ～ 8 min，5% ～ 30% A; 8 ～ 15 min，30% ～ 40% A; 15 ～ 20 min，40% ～60% A; 20～30 min，60% ～ 70% A; 30 ～ 33 min，70% ～5% A; 33 ～ 38 min，5% ～ 5% A) ，柱溫 30 ℃，流速 0． 8 mL·min－1 ，進(jìn)樣量 10 μL，檢測(cè)波長(zhǎng) 254 nm。在此色譜條件下 6 種對(duì)照品理論板數(shù)均大 于 5 000，色譜峰對(duì)稱(chēng)性良好( 見(jiàn)圖 1) 。

精密取大豆苷、黃 豆黃苷、染料木苷、大豆苷元、黃豆黃素和染料木素 對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加入甲醇超聲溶解，制成質(zhì) 量濃度分別為 1． 056、1． 112、0． 968、1． 024、0． 134 和 1．024 mg·mL－1 的單一對(duì)照品儲(chǔ)備液，備用。分別 精密量取上述對(duì)照品溶液適量，置同一容量瓶中，加 入 50%甲醇至刻度，即得大豆苷 52．8 μg·mL－1 、黃 豆黃苷 55．6 μg·mL－1 、染料木苷 48．4 μg·mL－1 、大 豆苷元 51．2 μg·mL－1 、黃豆黃素 53．6 μg·mL－1 和 染料木素 51．2 μg·mL－1 的混合對(duì)照品溶液。取重復(fù)性試驗(yàn)同批次淡豆豉粉 末約 1 g，精密稱(chēng)定，平行 6 份，每份分別精密加入近 似等量的 6 種對(duì)照品，按“2．2．2”項(xiàng)下方法制備供試 品溶液，按“2．1”項(xiàng)下測(cè)定各成分的峰面積，計(jì)算各 個(gè)化合物的回收率和回收率的 RSD 結(jié)果見(jiàn)表 3，結(jié) 果表明該方法回收率良好。

3 討論

檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇，通過(guò)對(duì) 6 種分析物進(jìn)行 DAD 全波長(zhǎng)掃描，大豆苷、黃豆黃苷、染料木苷、大豆苷 元、黃豆黃素和染料木素的最大吸收波長(zhǎng)分別為 250、258、260、248、257、260 nm，綜合 6 種黃酮類(lèi)成 分在 254 nm 處均有良好的紫外吸收。因此，選擇 254 nm 作為檢測(cè)波長(zhǎng)。