滇桂艾納香分析（昆山舒美KQ-500E）

1 材料 

1.1 儀器 

Agilent 1100型高效液相色譜儀（安捷倫公 司）；XP205型電子天平（1/10萬，梅特勒公 司）；Milli-Q超純水機（Millipore公司）；KQ500E型醫用數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；PCR儀（ABI VERITI）；MM400球 磨儀（Retsch公司）；微量紫外分光光度計（Nano Value）；EPS-301電泳儀（Amersham公司）；全 自動凝膠成像系統（Syngene公司）。 

1.2 對照品 

綠原酸（批號110753-201314）、3,5-O-二 咖啡酰基奎寧酸（批號111782-201807）和4,5-O二咖啡酰基奎寧酸（批號111894-201102）由中國 食品藥品檢定研究院提供；新綠原酸（批號NCA658144）、隱綠原酸（批號CCA-658288）和3,4- O-二咖啡酰基奎寧酸（批號DCA-250224）由成都 曼思特生物科技有限公司提供；1,3,5-O-三咖啡酰 基奎寧酸（批號TCK-662510）由上海詩丹德標準 技術服務有限公司提供。以上對照品經HPLC-DAD （面積歸一化法）檢測純度均大于98.0%。

1.3 試劑 

乙腈（色譜純，Fisher公司）；磷酸、甲 醇（分析純，國藥集團化學試劑公司）；植 物基因組DNA提取試劑盒（Plant Genomic DNAkit，TIANGEN）；2×Taq Master Mix緩沖液 （GK8006，GENEray）；ExRed（ZS203-1， 庒盟生物）；瓊脂糖（50002，Lonza）；ITS2 引物（上海捷瑞生物工程有限公司，ITS2F:5'- ATGCGATACTTGGTGTGAAT-3'；ITS3R:5'-GACG CTCTCCAGACTACAAT-3'）。

1.4 樣品 

6批滇桂艾納香、7批東風草、3批高艾納香均 由本課題組野外采集；同時制作相應的臘葉標本送 廣西中醫研究院，由黃云峰副研究員鑒定為滇桂艾 納香B.riparia、東風草B.megacephala.、高艾納香 B.repanda。1

2 基原鑒定及生藥學鑒別

滇桂艾納香臘葉標本于2018年3月19日采自廣 西百色市右江區大王嶺，為攀援狀草質藤本。莖圓柱形，葉無柄，葉片卵狀長圓形，邊緣有疏生的點 狀細齒，兩面無毛或被疏柔毛。頭狀花序多數， 徑5～8 mm，在腋生枝頂端排列成密圓錐花序，多 數小圓錐花序再排列成具葉的大圓錐花序，有長 5～10 mm的花序柄；總苞鐘形或圓柱形。東風草標本于2018年3月21日采自貴州省興義 市萬峰湖，攀援狀草質藤本或基部木質。莖圓柱 形，葉片卵形，邊緣有疏細齒，下面無毛或多少被疏毛。頭狀花序疏散，直徑1.5～2 cm，通常1～7 個在腋生小枝頂端排列成總狀或近傘房狀花序，再 排成大型具葉的圓錐花序；花序柄長1～3 cm；總 苞半球形。

3 薄層鑒別 

按滇桂艾納香現行質量標準中的薄層鑒別方 法對滇桂艾納香、東風草及高艾納香進行對比試 驗，結果發現，三者均具有相同的一個主斑點，表 明現行質量標準的方法缺乏專屬性，需要對其薄層 方法進行更深入的研究。研究結果建立了兩個自擬 方法，方法一是基于滇桂艾納香中的主要成分（咖 啡酰基奎寧酸類）建立的，該方法可將高艾納香與 滇桂艾納香、東風草區別開；鑒于方法一未能有效 區分滇桂艾納香及東風草，通過更換展開條件和顯 色方法建立了方法二，該方法可將三者區分開，專屬性較強。

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