測定苯唑嗪膠囊中主成分及有關物質的含量

苯唑嗪（研發代號：Q808）化學名為 6-（4-氯苯氧 基）-四唑并酞嗪，是一種新的抗癲癇藥物，具有增 強腦內核團自發性抑制性突觸后電流（sIPSC）頻率、增 加γ-氨基丁酸（GABA）含量的作用，其保護指數（PI）優 于卡馬西平和盧非酰胺，在整體和離體癲癇模型中均具 有較強的抗癲癇作用，與傳統抗癲癇藥物苯妥英鈉、托 吡酯相比，具有較強的抗驚厥作用且神經毒性較低。 以苯唑嗪為原料制成的苯唑嗪膠囊目前已獲得臨床試 驗批件，正在進行臨床試驗，在國內外尚未有關于該藥 質量標準的研究報道。

1 材料

1.1 儀器

LC-2010AHT型HPLC儀，包括二極管陣列檢測器、 色譜工作站（日本島津公司）；KQ-2200型超聲波清洗儀 （昆山舒美超聲儀器有限公司，文中采用參數為功率：250 W，頻率：40 kHz）；BT125D 型十萬分之一電子天平（德國賽多利斯公司）。

1.2 藥品與試劑

苯唑嗪對照品（批號：20140331，純度：＞99.9％）、5- 氯四唑并酞嗪對照品、6-（2，4-二氯 苯氧基）-四唑并酞嗪對照品均由延 邊大學藥學院藥物化學教研部制備；苯唑嗪膠囊（吉 林省中醫藥科學院制劑室，批號：20140521、20140522、20140523，規格：0.15 g）；乳糖（美國 Foremost Farms 公 司）；交聯聚維酮（PVPP，國藥集團化學試劑有限公司）； 微晶纖維素（湖州展望藥業有限公司）；聚乙烯己內酰 胺-聚醋酸乙烯酯-聚乙二醇接枝共聚物（Soluplus®，德國 巴斯夫有限公司）；甲醇、乙腈均為色譜純，水為純凈水， 其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色 譜 柱 ：Inertsil ODS- 2 C18（250 mm × 4.6 mm，5 µm）；流動相：乙腈-水（55∶45，V/V）；檢測波長：223 nm； 柱溫：25 ℃；流速：1.0 mL/min；進樣量：20 µL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液

精密稱取苯唑嗪對照品10.04 mg， 置于50 mL量瓶中，加乙腈超聲（功率：250 W，頻率：40 kHz，下同）10 min；取出，放冷，稀釋至刻度，搖勻，精密 量取 5 mL，置于 25 mL 量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖 勻，制成每1 mL中含苯唑嗪40.16 μg的溶液，作為對照 品溶液。

2.2.2 供試品溶液

精密稱取苯唑嗪膠囊內容物適量 （約相當于苯唑嗪10 mg），置于50 mL量瓶中，用乙腈超 聲 10 min；取出，放冷，稀釋至刻度，搖勻，精密量取 5 mL，置于25 mL量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 系統適用性溶液

精密稱取雜質 1、雜質 2 對照 品各5 mg，置于10 mL量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，得系 統適用性貯備液；精密稱取苯唑嗪對照品 10.06 mg，置 于50 mL量瓶中；精密移取系統適用性貯備液1 mL，置 于上述50 mL量瓶中，定容，搖勻，得系統適用性溶液。

2.2.4 空白輔料溶液

按樣品處方精密稱取除苯唑嗪 外的空白輔料適量，再按“2.2.2”項下方法進行制備，即 得空白輔料溶液。

2.3 系統適用性試驗

精密量取“2.2”項下對照品溶液、供試品溶液（批號：20140523）、系統適用性溶液及空白輔料溶液各20 μL， 按“2.1”項下色譜條件進樣分析。結果，雜質1、雜質2與 苯唑嗪的分離度＞5，其余各峰之間的分離度＞1.5，主峰 拖尾因子為1.14～1.16，理論板數以主成分峰計＞5 000， 詳見圖1。


份加入30％過氧化氫溶液5 mL，室溫放置3 h，加乙腈稀 釋至刻度，搖勻，作為氧化破壞溶液；1份加入5 mL蒸餾 水，70 ℃水浴加熱3 h，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為高 溫破壞溶液；1 份加入乙腈 5 mL，使溶解，置于 4 500 lx 條件下照射18 h，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為光照破 壞溶液。精密量取上述 5 種溶液及未破壞樣品溶液各 20 µL，分別注入色譜儀，按“2.1”項下色譜條件進樣測 定，記錄其色譜圖。

2.4 方法專屬性考察

取苯唑嗪膠囊10粒（批號：20140523）內容物研細， 精密稱取約5 mg，共5份，分別置于25 mL量瓶中：1份 加入1 mol/L的鹽酸溶液 5 mL，55 ℃水浴加熱3 h，用1 mol/L的氫氧化鈉溶液中和，調節至中性，加乙腈稀釋至 刻度，搖勻，作為酸破壞溶液；1份加入0.1 mol/L的氫氧 化鈉溶液 5 mL，靜置3 h，用1 mol/L的鹽酸溶液中和，調 節至中性，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為堿破壞溶液；

3 討論

苯唑嗪膠囊是針對癲癇治療研發的化學藥品1.1類 新藥 ，目前，相關研究已對苯唑嗪原料藥中的雜質進行了分離鑒定及初步的測定 ，但并未對其進行系統的 質量檢查方法研究，特別是對苯唑嗪膠囊，目前國內外 尚無相關研究的文獻報道。本試驗采用HPLC法，對苯 唑嗪膠囊主成分的含量及有關物質進行了深入研究，以 更好、更全面地控制該制劑的質量。 在色譜條件優化過程中，筆者主要考察了流動相組 成以及檢測波長對分離效果的影響。在流動相組成中， 分別比較了甲醇-水和乙腈-水為流動相的分離效果，結 果表明，選擇乙腈-水（55∶45，V/V）為流動相時，主成分 與各雜質間的分離效果良好（分離度＞2），保留時間（雜 質1：5.355 min；主成分：12.224 min；雜質2：18.088 min） 合適，且主成分與雜質均能滿足分析要求。采用二極管 陣列檢測器對檢測波長進行篩選，發現各成分在223 nm 波長處有最大吸收，且靈敏度較高。故選擇223 nm作為 本研究的檢測波長。