胡蘿卜素的組成分析-KQ-300DE的應用！

杏（Prunus armeniaca L.）屬薔薇科（Rosaceae）， 原產中國。我國蘊藏著豐富的杏類胡蘿卜素資源，據2016年統計，新疆杏種植面積達187.6萬 畝，產量達119.8萬 t ， 居全國首位，被稱為世界四大杏產區之一，其中庫買提杏因其具有香氣濃郁、果肉厚、纖維少、可溶固形物含 量高、甜酸適口、果肉細膩滑潤等特點，最為出名，具 有優良的加工品質和廣闊的商業價值。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

庫買提杏于2018年6月購于新疆烏魯木齊市北園春 水果市場，選取杏果果皮顏色由綠色自然轉為全黃，并 且大小均勻的完好無損的果實，用小刀切分為兩瓣，去 核，用液氮快速冷凍，置于－20 ℃冰箱備用。 標準品：全反式-β-胡蘿卜素（UV≥97%）、全 反式-β-隱黃素（HPLC≥97%）、全反式-α-胡蘿卜素（HPLC≥98%），甲基叔丁基醚（methyl tert-butyl ether，MTBE）、甲醇（均為色譜純） 美國Sigma 公司；丙酮、石油醚、抗氧化劑2,6-二叔丁基-4-甲基苯 酚（2,6-ditertbutyl-4-methylphenol，BHT）、無水硫酸鈉 （均為分析純） 天津市光復科技發展有限公司。

1.2 儀器與設備

TGL-16G高速冷凍離心機 上海安亭科學儀器廠； KQ-300DE數控超聲波清洗器 江蘇昆山舒美超聲儀器有限 公司；FA2104N電子天平 上海民橋精密科學儀器有 限公司；InertsilC30色譜柱 日本島津（中國）公司； N-1001旋轉蒸發儀 上海愛朗儀器有限公司；Triple Quad LC/MS 6410 HPLC-DAD-APCI-MS聯用儀（HPLC 儀、真空脫氣機、四元梯度洗脫泵、柱溫箱、DAD、三 重四極桿串聯質譜儀、APCI離子源） 美國安捷倫科 技公司。

1.3 方法

1.3.1 類胡蘿卜素的提取

用液氮快速冷凍已去核杏果并研磨至粉末，精確稱 取10?g至磨口錐形瓶中，加入85%丙酮溶液150?mL（含 0.1%?BHT）避光超聲浸提15?min，重復浸提至殘渣無色 后合并浸提液，離心15?min（4 ℃、8?000?r/min），將上 清液收集于分液漏斗中，加500?mL石油醚進行萃取，待 分層后分流水相，有機相用盛有40?g無水硫酸鈉的漏斗 收集至圓底燒瓶中，真空25 ℃旋轉蒸發近干，流動相復 溶最終產物并定容至5?mL棕色容量瓶，低溫避光保存待 用，進樣前使用0.22?μm有機濾膜過濾。

1.3.2 類胡蘿卜素的HPLC-DAD-APCI-MS定性分析

HPLC條件參照Huang?Wenshu和Etzbach等的方 法，并略作改進。流動相A為甲醇-MTBE-水（81∶15∶4， V/V），流動相B為甲醇-MTBE-水（7∶90∶3，V/V）， AB相中分別含0.1%?BHT；流速1?mL/min；線性梯度洗 脫，B相在0～100?min內體積分數由0%增至100%；C30 色譜柱（4.6?mm×250?mm，5?μm）；進樣量10?μL； 柱溫3 0 ℃；檢測波長450?nm；DAD光譜收集范圍 300～500?nm。 MS條件：APCI正離子源；MRM掃描；質譜流速 1?mL/min；干燥氣體流速4 L/min；毛細管電壓2 500 V； 霧化氣壓力30 psi；汽化溫度350 ℃；蒸汽溫度320 ℃； 電暈電流4?μA。

1.3.3 庫買提杏中類胡蘿卜素的定量分析

采用1.3.2節HPLC條件，有標準品的全反式類胡蘿卜 素組分，采用外標法定量分析類胡蘿卜素，順式類胡蘿 卜素組分無標準品，但其消光系數與全反式相似，故根 據替換計算法：采用對應的全反式類胡蘿卜素曲線方程對類胡蘿卜素的異構體進行定量，結果以庫買提杏干 質量計算（μg/g）。

2 結果與分析

本研究綜合類胡蘿卜素HPLC、MS及光譜信息， 并結合文獻對庫買提杏中主要類胡蘿卜素組分進行鑒定 分析。由于類胡蘿卜素異構體間分子質量相同，僅根據質 譜圖無法判別其歸屬，還需結合其紫外-可見光譜特征、 HPLC洗脫順序及相關文獻進行鑒定。首先獲取到每 個組分的質譜信息，明確分子質量后，再結合光譜特 征判斷歸屬，國內外研究中，廣泛采用Q值作為異構 體光譜特征的判定依據。根據前人研究結 果，在同一流動相中越早洗脫出的順式異構體，其順 式雙鍵的位置越靠近分子中心，順式峰吸收強度越大 （Q值越大），為中心異構體的概率越大，并且15-或 13-順-β-胡蘿卜素具有約在340?nm波長處存在強吸收峰的特點。結合峰4出峰順序特征及光譜特征：峰4在β-胡 蘿卜素的異構體中HPLC最早出峰，具有最大Q值，且在340?nm波長處有順式吸收峰，再結合其最大吸收波 長，可判定峰4為中心異構體：15-順式-β-胡蘿卜素；由 β-胡蘿卜素異構體的洗脫規律可知：13-和15-順式異 構體均在全反式之前出峰，9-順式異構體在全反式之后 出峰，結合Q值及光譜信息，可判定峰5為13-順式-β-胡蘿 卜素，峰8為9-順式-β-胡蘿卜素。

3 結 論

庫買提杏中主要的全反式類胡蘿卜素為β-胡蘿卜素 （114?μg/g），其次為α-胡蘿卜素（8.3?μg/g），含少量 β-隱黃素（5.4?μg/g）；主要的順式類胡蘿卜素異構體為 β-胡蘿卜素異構體（9-順式、13-順式和15-順式）和β-隱 黃素異構體（13-順式和15-順式）。其中9-順式-β-胡蘿卜 素含量高達18.8?μg/g，是庫買提杏中含量最高的順式類 胡蘿卜素。