昆山舒美KQ500DE用于測定亞麻籽油苦味肽

隨著現(xiàn)代人對養(yǎng)生的關(guān)注，亞麻籽油因具有多 種保健功能日漸得到消費者的青睞。然而，亞麻 籽油在儲存中常易氧化變苦，Brühl 等鑒定證 實亞麻籽油的關(guān)鍵苦味化合物為一種環(huán)八肽 ( Cyclolinopeptide E，CLE) ，俗稱苦味肽。

1 材料與方法

1． 1 試驗材料

1． 1． 1 原料與試劑

亞麻籽油，由寧夏君星坊食品科技有限公司 提供。 SPE 硅膠小柱，上海安譜公司; Cyclolinopeptide E 標準品，純度 99% ，加拿大 Prairie Tide 化學(xué)品公 司; 無水甲醇、乙酸乙酯、正己烷、二氯甲烷、無水乙 醇，分析純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司; 乙腈、甲 醇，色譜純，百靈威科技有限公司。

1． 1． 2 儀器與設(shè)備

Waters Acquity 型超高效液相色譜儀，Waters Synapt Q － TOF － MS 質(zhì)譜儀，Masslynx 4． 1 色譜工作 站; Waters1525 高效液相色譜儀，Waters 2996 可變 波長二極管陣列檢測器; KQ-500de，昆山舒美超聲儀器有限公司; Ｒ － 501 旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)器，上海申順生物科技有限公司; SHZ － 3 循環(huán) 水多用真空泵; AL204 電子天平，梅特勒 － 托利多儀器有限公司。

1． 2 試驗方法

1． 2． 1 溶劑萃取法提取亞麻籽油中苦味肽

1． 2． 1． 1 甲醇溶劑萃取法

參考 Aladedunye 等的環(huán)肽提取方法。稱取 1 g 亞麻 籽 油 加 入 10 mL 色 譜 純 甲 醇，旋 渦 振 蕩 1 min，超聲處理 1 h，離心后收集上清液。

1． 2． 1． 2 乙醇溶劑萃取法

參考利嘉祥等的方法。稱取 5 g 亞麻籽油， 以料液比 5∶ 8 加入無水乙醇，旋渦振蕩 5 min。離心 后吸取上清液，重復(fù)萃取 3 次，合并萃取液，40 ℃ 旋 蒸脫溶，用色譜級甲醇將燒瓶底部的油移至離心管 中，旋渦振蕩并離心，吸取上清液至 10 mL 的容量瓶 中，定容。

1． 2． 2 固相萃取法提取亞麻籽油中苦味肽

比較填料為 0． 5、1、2 g 不同規(guī)格 SPE 硅膠小柱 的前處理效果，參考 Gui 等的樣品前處理方法。 先分別將硅膠柱用 1、2、4 mL 正己烷活化，將 1 g 油 樣溶于 1 mL 正己烷，上柱。在真空條件下，依次用 正己烷、正己烷 － 乙酸乙酯( 體積比 8∶ 2) 、正己烷 － 乙酸乙酯( 體積比 5∶ 5) 各 10 mL 進行洗脫，將小柱 抽干后，再分別用乙酸乙酯、甲醇 － 二氯甲烷( 體積 比 1∶ 9) 各 10 mL 進行洗脫，收集最后兩步洗脫液， 合并后于 40 ℃旋蒸脫溶，用色譜級甲醇分 2 ～ 3 次 復(fù)溶圓底燒瓶底部的環(huán)肽，并通過超聲促進溶解，定 容至 5 mL。

2 結(jié)果與討論

取一苦味亞麻籽油為試驗原料，分別用溶劑萃 取法和固相萃取法進行前處理，通過 HPLC 測定 CLE 含量。所有前處理方法測得的 HPLC 譜圖顯示，通過溶劑萃取法和固相萃取法前處理，CLE 均 可以得到良好的分離效果，所測 CLE 在色譜圖中均 于保留時間 19 min 左右出峰，前處理不影響 CLE 的 出峰。但是，就不同前處理方法油樣的各色譜圖的 雜峰而言，與 SPE 硅膠小柱前處理相比，溶劑萃取 前處理后油樣的色譜圖中保留時間在 28 min 以后 有較多雜峰，其中含有較多的甘油三酯，這些雜質(zhì)的 存在對于保護液相色譜柱、提高柱效是極為不利的。 溶劑萃取預(yù)處理亞麻籽油的 HPLC 譜圖之所以有大 量雜峰，是由于油脂在萃取溶劑中存在一定程度的 溶解，尤其是乙醇萃取法樣品，由于其對油脂溶解性 相對更好，雜峰尤為明顯，即使以油脂溶解性較 差的甲醇為例，甲醇萃取法預(yù)處理油樣的 HPLC 譜 圖中，所含雜質(zhì)的峰面積是 CLE 峰面積的 7． 14 倍， 而 SPE 硅膠小柱前處理油樣將甘油三酯及其他雜 質(zhì)有效去除，其色譜圖所含雜質(zhì)的峰面積是 CLE 峰 面積的 4． 23 倍( 甲醇萃取預(yù)處理和 SPE 預(yù)處理亞 麻籽油 HPLC 譜圖見圖 1，其余色譜圖略) 。因此， 為了保護色譜柱、提高柱效、延長柱子使用壽命，固 相萃取法預(yù)處理較溶劑萃取更理想。

不同方法預(yù)處理的除雜效果存在較大差異，但 是就分析檢測方法的樣品前處理而言，僅僅實現(xiàn)有 效除雜是不夠的，脫除雜質(zhì)的同時，還須實現(xiàn)待測物 的有效保留，因此進一步比較了同一亞麻籽油樣品 經(jīng)不同前處理后，所測得的 CLE 含量，評估不同前 處理方法對亞麻籽油 CLE 測定的有效性。

3 結(jié) 論

本文比較了 HPLC 定量測定亞麻籽油苦味肽的 溶劑萃取法和固相萃取法的純化富集前處理效果。 就除雜效果而言，固相萃取法比溶劑萃取法所提取 的環(huán)肽樣品中甘油三酯及其他雜質(zhì)顯著減少，有利 于保護液相色譜柱、提高柱效; 就提取效果而言，使 用填料規(guī)格為 0． 5 g 的 SPE 硅膠小柱可以得到較好 的分離及富集效果。經(jīng)過定性分析、準確度及精密 度評價，證明此方法準確可靠，可作為測定亞麻籽油 中苦味肽含量的前處理方法。



 

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