杜仲平壓片指紋圖譜分析-舒美KQ-300DE的使用！！

杜仲平壓片是由杜仲葉經水煎煮、提取加工制 成的片劑，能降血壓，強筋健骨；適用于高血壓、 腰膝酸痛、筋骨痿軟等癥。現代研究表明，杜仲葉 中的有效活性成分主要包括以綠原酸為代表的苯丙 素類、蘆丁為代表的黃酮類等化學成分。綠原酸 是杜仲葉的主要活性成分，具有利膽、抗菌、抗病 毒、降壓等多種藥理作用。蘆丁具有降血壓、降血 脂、抗氧化以及舒張血管等廣泛的生物學活性 。 杜仲平壓片的生產廠家較多，為保證該藥物治療效 果的穩定，需對該制劑質量進行嚴格控制。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 1260 高效液相色譜儀（配制 DAD 型檢測器），美國 Agilent 公司；AUW-220D 電子天 平，日本島津公司；KQ-300DE超聲清洗器，昆山舒美超聲儀器有限公司。

1.2 藥物及試劑

綠原酸（批號：110753-201716，純 度：99.3%）、蘆丁對照品（批號：100080-201408， 純度：92.8%），中國食品藥品檢定研究院；新綠原 酸（批號：18032403，純度：99.07%），成都曼思特 生物科技有限公司；甲醇、乙腈為色譜純，德國 MERCK公司；其余試劑、試藥均為分析純，水為純 水。17批杜仲平壓片樣品來源，見表1。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Thermo Hypersil Gold-C18柱 （4.6 mm × 250 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-0.1% 磷酸溶液（B）；梯度洗脫：0～10 min：5%→10%A， 10～20 min： 10% →16% A， 20～30 min： 16% A， 30～35 min： 16% →25% A， 35～45 min： 25% A， 45～45.1 min：25%→5%A，45.1～50 min：5%A；流 速：1.0 mL·min- 1 ；柱溫：30 ℃；檢測波長：354 nm；進樣量：10 μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 供試品溶液

取杜仲平壓片樣品適量，除去薄 膜衣或糖衣，研細，取粉末約1 g，精密稱定，置錐 形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱定質量，超聲30 min，放冷，再次稱定質量，用 50%甲醇補足減 失的質量，搖勻，濾過，即得。

2.2.2 混合對照品溶液

分別精密稱取新綠原酸、綠 原酸和蘆丁對照品適量，用 50%甲醇定容至刻度， 制成濃度分別為38.21、255.61、19.72 μg · mL-1 的對 照品儲備溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液

按杜仲平壓片處方工藝，制成 只含輔料的陰性樣品。取陰性樣品適量，研細，按 2.2.1 項下方法制成陰性樣品溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 精密度試驗

分別精密吸取同一供試品溶液 （批號：171510）10 μL，按 2.1 項下色譜條件，連續 進樣6次，記錄色譜圖。以綠原酸為參照峰（S），計 算各共有峰的相對保留時間和相對峰面積。結果顯 示，相對保留時間相對標準偏差（RSD）值均小于 2%，相對峰面積RSD值均小于3%，表明儀器精密度 良好。

2.3.2 穩定性試驗

分別精密吸取同一供試品溶液 （批號：171510）10 μL，按 2.1 項下的色譜條件，分 別在0、2、6、10、18、24 h進樣，記錄色譜圖。以 綠原酸為參照峰（S），計算各共有峰的相對保留時間 和相對峰面積。結果顯示，相對保留時間 RSD 值均 小于 1%，相對峰面積 RSD 值均小于 3%，表明供試 品在24 h內穩定性良好。

2.3.3 重復性試驗

取同一批杜仲平壓片樣品（批 號：171510），依照2.2.1項下方法平行制備6份供試 品溶液，按2.1項下的色譜條件進行分析，記錄色譜圖。以綠原酸為參照峰（S），計算各共有峰的相對保 留時間和相對峰面積。結果顯示，相對保留時間 RSD 值均小于 2%，相對峰面積 RSD 值均小于 3%， 表明該方法重復性良好。


3 討論

在比較了不同色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）、Waters Sunfire C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）、Thermo Hypersil Gold-C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm），不同梯度洗脫體系（乙腈水，乙腈-0.5%乙酸溶液，乙腈-0.1%磷酸溶液、甲 醇-0.1%磷酸溶液不同波長（采用DAD檢測器 對供試品溶液進行紫外全波長掃描） 對指紋圖譜測 定的影響的基礎上，選擇了本實驗方案，實驗結果 顯示采用Thermo Hypersil Gold-C18色譜柱、以乙腈0.1%磷酸為流動相梯度洗脫、在波長 354 nm 條件 下，色譜峰信息較為豐富，各特征峰對稱性良好， 吸收較大、分離效果為最好，故最終確定2.1項下的 色譜條件作為杜仲平壓片樣品指紋圖譜測定的色譜 條件。