昆山舒美對神經(jīng)再生的實驗研究

0 引言

周圍神經(jīng)損傷的治療一直是困擾醫(yī)學界的難題，雖然 顯微外科技術(shù)已能做到神經(jīng)斷端的精準吻合，但神經(jīng)損傷 修復(fù)的效果依然不令人滿意。目前對于周圍神經(jīng)損傷修 復(fù)的熱點研究主要集中于神經(jīng)纖維、髓鞘等結(jié)構(gòu)。人 們發(fā)現(xiàn)神經(jīng)修復(fù)過程還與神經(jīng)再生過程中各種調(diào)控因素有關(guān)，其中局部瘢痕形成就是阻礙神經(jīng)再生的重要原因之一。已有研究證實，創(chuàng)傷導(dǎo)致神經(jīng)損傷修復(fù)過程中的瘢 痕形成機制與其他組織的瘢痕形成在生理上是相似的，即瘢痕形成的主要特征是成纖維細胞增殖過程中產(chǎn)生的Ⅰ型 膠原異常沉積。

1 材料和方法

1.1 設(shè)計

動物對比觀察性實驗。

1.2 時間及地點

實驗于2017年1月至2019年1月在濱州 醫(yī)學院煙臺附屬醫(yī)院、天津醫(yī)科大學第二醫(yī)院完成。

1.3 材料

鹽酸維拉帕米(上海酶聯(lián)生物科技有限公司)； 聚乳酸-羥基乙酸共聚物理化性能，見表1；二氯甲烷(山東 鈺來化工科技有限公司)；磁性氧化鐵顆粒(10-20 nm)。

實驗動物：SPF 級 SD 大鼠 45只，雌雄不拘，體質(zhì) 量(180±10) g，購自天津奧晨實驗動物有限公司，生產(chǎn)許 可證號： SYXK( 津 )2016-0012 。所有大鼠均在室溫 18-25 ℃、相對濕度50%的條件下飼養(yǎng)。實驗已通過濱州醫(yī)學院煙臺附屬醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準，批準號： F-KY-0022-20161201-01。實驗用主要儀器：超聲波清洗機(KQ2200DE，昆山舒美超聲儀器有限公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(RY-09-20，上海禾汽玻璃 儀器有限公司)；激光粒度分析儀(成都精新粉體測試設(shè)備 有限公司)；Agilent 1260 高效液相色譜儀(安捷倫公司， 美國)；高速冷凍離心機(TGL-20M，湘儀離心機儀器有限 公司)；核磁共振儀(Philips Achieva 3.0 T)；尼高力 Viking Quest 肌電誘發(fā)電位儀，1.0 T磁場。

1.4 實驗方法 

參考龔道瓊等與課題組前期研究中單乳化溶劑蒸發(fā)法制備磁靶向維拉帕 米納米顆粒。將20 mg聚乳酸-羥基乙酸共聚物完全溶解于 500 μL二氯甲烷中，超聲振動后加入16 μL磁性氧化鐵顆粒 超聲蠕動混勻；將另外10 mg鹽酸維拉帕米放入500 μL水 中，攪拌器攪拌、搖晃，乳化后將兩管液體混合，再次加 入5 mL水溶液，然后利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器去除二氯甲烷， 9 000 r/min離心30 min；去除上清液，完成制備。將樣品 在4 ℃下冷凍干燥24 h，制成磁靶向維拉帕米納米顆粒凍 干粉。利用透射顯微鏡觀察納米顆粒形態(tài)，粒徑分析儀測 定納米顆粒的粒徑。

2 結(jié)果

透射電鏡可見磁 靶向維拉帕米納米顆粒呈球形，粒子內(nèi)包裹了大量磁性氧 化鐵鐵顆粒，粒子分散性好，無明顯聚集現(xiàn)象,用激光粒度分析儀測得磁靶向維拉帕米納米顆粒粒徑 為(208.3±0.8) nm，粒徑分布窄，溶液中分布均勻。磁靶 向維拉帕米納米顆粒的包封率為(70.21±3.25)%，載藥量為 5.23%。A、B、C組坐骨神經(jīng)復(fù)合 肌動作電位的傳導(dǎo)速度分別為(32.7±4.1)，(24.3±5.3)， (20.8±4.9) m/s，3組間神經(jīng)傳導(dǎo)速度比較差異均有顯著性 意義(F=24.425，P < 0.001)，A組神經(jīng)傳導(dǎo)速度快于B、C 組(P < 0.001)，B、C組傳導(dǎo)速度比較差異無顯著性意義 (P=0.052)。

3 討論

周圍神經(jīng)損傷修復(fù)是一個非常復(fù)雜的過程，其中瘢痕 形成是阻礙神經(jīng)修復(fù)的主要原因之一。周圍神經(jīng)損傷后， 局部膠原纖維異常沉積，早期可以阻礙神經(jīng)軸索向遠端的 延伸，晚期又會壓迫神經(jīng)損傷處，影響局部微循環(huán)，妨礙神經(jīng)恢復(fù)。國內(nèi)外學者對周圍神經(jīng)損傷的治療多關(guān)注于對 神經(jīng)纖維、髓鞘等神經(jīng)成分有促進作用的因素，忽視了對 修復(fù)過程中瘢痕的抑制性研究，這些非神經(jīng)成分占據(jù)了神 經(jīng)橫截面積的50%-75%，或許是導(dǎo)致目前研究困境的瓶 頸。因此有效抑制周圍神經(jīng)損傷后局部瘢痕形成可能是加 快神經(jīng)再生的關(guān)鍵。周圍神經(jīng)修復(fù)過程中成纖維細胞增殖釋放細胞外基 質(zhì)，其中主要是膠原，在損傷部位形成瘢痕組織。研究發(fā) 現(xiàn)，鈣通道阻滯劑維拉帕米可通過調(diào)節(jié)成纖維細胞內(nèi)外鈣 離子濃度來影響細胞外基質(zhì)的合成和代謝過程，尤其是可 減少膠原的合成和分泌，其不僅在術(shù)后粘連、增生性瘢 痕和纖維化疾病治療中有明顯的效果，并且對抑制周 圍神經(jīng)再生過程中的瘢痕形成也表現(xiàn)出了良好的應(yīng)用前景。



 

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