絞股藍皂苷A含量測定-KQ-800KDE使用

絞股藍為葫蘆科絞股藍屬植物，具有清肺化痰、補 氣生津、健脾安神等功效，其化學成分復雜，主要包 括皂苷類、多糖類、黃酮類、氨基酸、微 量元素等多種成分，主要活性成分為皂苷類。 現代藥理研究表明絞股藍具有降血脂、抗動脈粥樣硬 化等作用。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

Agilent 1260 液相色譜( 配有 G1311C 型四 元梯度泵，G1329B 型自動進樣器，G1316A 型柱溫箱， G4212B 型 DAD 檢測器; Agilent Technologies，美國) ; XP-205 電 子 天 平 ( 瑞 士 Mettler Toledo 公 司，感 量: 0．01 mg) ; 昆山舒美KQ-800KDE 超聲儀( 中國昆山市超聲儀器有限公司) ; Milli-Q 超純水處理系統( 美國 Millipore) 。

1．2 試藥

乙腈( 色譜純，批號: 165741，美國 Fisher 公司) ; 實驗室用水為超純水; 絞股藍皂苷 A 對照品 ( 批號: drk-1392-911223，成都德銳可生物科技有限公 司，含 量: 98． 0%) ; 人 參 皂 苷 Ｒb1 ( 批 號: 110704- 200318) ，人參皂苷 Ｒb3( 批號: 111686-200501) ，人參 皂苷 Ｒg1( 批號: 110703-200424) ，人參皂苷 Ｒd( 批號: 111818-201603) ，均由中國食品藥品檢定研究院提供;絞股藍總苷分散片( 亞寶藥業集團股份有限公司，批 號: 160702，160901，161101，規格: 每片含絞股藍總苷 60 mg) ; 羥丙基纖維素( 國藥集團化學試劑有限公司， 批號: 20151020) ; 羧甲基淀粉鈉( 國藥集團化學試劑 有限公司，批號: 20150311) ; 硬脂酸鎂( 營口市第二制 藥廠生產，北京市燕京制藥廠分裝，批號: 20000609) 。

2 方法與結果

2．1 色譜條件

色譜柱: Alltima C18色譜柱( 150 mm× 4．6 mm，5 μm) ; 流 動 相: 乙 腈-水 ( 31 ∶69) ; 流 速: 1．0 mL·min－1 ; 檢測波長 210 nm; 進樣體積: 20 μL; 柱 溫為 30 ℃。樣品進樣前均經過孔徑 0．22 μm 尼龍濾 膜濾過。

2．2 對照品溶液的制備

取絞股藍皂苷 A 對照品 16．5 mg，精密稱定，置于 50 mL 量瓶中，加甲醇適量，超 聲使溶解并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為絞股藍皂苷 A 儲備液( 0．33 mg·mL－1 ) 。精密量取絞股藍皂苷 A 儲 備液 1，2，3，4，5 mL 于 10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋成濃 度約為 33，66，99，132，165 μg·mL－1 的絞股藍皂苷 A 對 照品溶液。中間濃度的對照品溶液用作含量測定。

2．3 供試品溶液及陰性對照溶液的制備

取本品 20 片，精密稱定，研細，精密稱取粉末適量( 相當于絞股 藍總苷 40 mg) ，置 10 mL 量瓶中，加甲醇適量，超聲 10 min，甲醇定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液。分 別稱取藥品說明書中記錄的輔料羥丙基纖維素、羧甲 基淀粉鈉、硬脂酸鎂各 0．1 g，置于 10 mL 量瓶中，同法 操作，配制不含絞股藍總苷的陰性對照溶液，用于專屬 性實驗。

2．4 專屬性實驗和系統適應性實驗

分別進樣分析 陰性對照溶液、對照品溶液和供試品溶液，結果見圖 1，樣品中其他成分和制劑輔料不干擾絞股藍皂苷 A 的測定。理論板數按絞股藍皂苷 A 計算不低于 3000。供試品溶液中主峰純度檢測閾值設定為 990，應符合 規定。

2．5 線性關系考察

取“2．2”項對照品溶液分別進 樣，記錄色譜圖，以濃度( μg·mL－1 ) 為橫坐標，峰面積 為縱坐標進行線性回歸。得到線性方程為 Y = 6．31X－ 7．95，r = 1．000 0，說明絞股藍皂苷 A 濃度在 32． 69 ～ 163．46 μg·mL－1 內與峰面積呈良好線性相關。將對 照品溶液逐級稀釋，在信噪比( S /N) 約為 10．0 時測得 定量限為 0．098 μg·mL－1 ，在 S /N 約為 3．0 時測得檢 測限為 0．033 μg·mL－1 。

2．6 精密度和穩定性實驗

取中間濃度的對照品溶 液連續進樣 6 次，記錄絞股藍皂苷 A 峰面積，峰面積 的 ＲSD 為 0．36%( n = 6) ，說明儀器精密度良好。對供 試品溶液( 批號: 160702) 分別于 0，2，4，8，12，24 h 進 樣分析，峰面積的 ＲSD 為 0．85%( n = 6) ，表明供試品 溶液在 24 h 內穩定性良好。

2．7 重 復 性 實 驗

取絞股藍總苷分散片 ( 批 號: 160702) 制備供試品溶液 6 份，分別進樣分析，計算得 到絞股藍皂苷 A 含量，含量的 ＲSD 為 1．9%( n = 6) ，說 明方法的重復性良好。

2．8 加樣回收率實驗

精密稱取樣品( 批號: 160702， 平均片質量為 0．465 6 g) 粉末 6 份，分別精密加入絞股 藍皂苷 A 儲備液 1．5 mL，按照“2．3”項下供試品溶液 的制備方法制得各加樣供試品溶液，進樣測定，計算加 樣回收率和 ＲSD，結果平均回收率為 97． 2%，ＲSD = 1．5%。見表 1。

2．9 樣品含量測定

應用本文建立的方法對 3 批絞 股藍總苷分散片進行測定，每個樣品制備 3 份，取平均 值，測得批號為 160702，160901，161101 的樣品中絞股 藍皂苷 A 的含量分別為 4．05，3．88 和 3．21 mg·g－1 ，說 明絞股藍總苷分散片生產工藝穩定。



3 討論

3．1 檢測波長的選擇取絞股藍皂苷 A 的對照品溶液

在 200～400 nm 范圍內進行全波長紫外光譜掃描， 結果顯示絞股藍皂苷 A 呈現末端吸收，故選用 210 nm 作為絞股藍皂苷 A 的檢測波長。

3．2 提取方式的選擇

分別考察 60%甲醇溶液、80% 甲醇溶液以及甲醇作為提取溶劑時提取效率，結果表 明，甲醇的提取效率最高，故選擇甲醇為提取溶劑; 提 取時間分別考察超聲 10，20 和 30 min，結果表明超聲 提取 10 min 即可將樣品中絞股藍皂苷 A 提取完全。

3．3 流動相的選擇

考察甲醇-水、 乙腈-水、乙腈-磷酸水等不同流動相，發現以甲醇作為 有機相時基線漂移相對嚴重，末端吸收干擾較強; 以乙 腈作為有機相時基線相對平穩，分離效果好，在水相中 加入磷酸溶液調節 pH 值，則對絞股藍皂苷 A 的峰型 影響不大，所以選擇乙腈-水為流動相。

3．4 專屬性實驗

本實驗考察絞股藍總皂苷中已有 含量測定研究報道的皂苷類成分，對絞股藍皂苷 A 含 量測定的干擾，在本實驗條件下，絞股藍皂苷 A 與人參 皂苷 Ｒb1、人參皂苷 Ｒb3、人參皂苷 Ｒg1、人參皂苷 Ｒd 的分離度均大于 1．5，說明上述成分不會干擾絞股藍皂 苷 A 的含量測定。 本實驗采用高效液相色譜法建立絞股藍總苷分散片中有效成分絞股藍皂苷 A 含量測定方法，該方法操 作簡便，結果準確可靠，可為絞股藍總苷分散片以及含 有絞股藍總皂苷的其他制劑的質量控制提供參考。