測定酵素食品中的匹可硫酸鈉(KQ500DE使用)

酵素及酵素食品來自日本天然健康的食品概 念，國內引用其調節新陳代謝的功能，宣稱酵素食品 具有通便減肥的功效。網絡上酵素食品主要有 果凍、糖果、蜜餞和飲料等，經發展已成為新興的暢 銷減肥產品。由于市場利潤巨大，減肥類非法添加 藥物層出不窮。2019 年初，本實驗室對宣稱通 便減肥的酵素食品進行風險監測，檢出一種減肥類 非添新成分，經確證為“匹可硫酸鈉”。

1 實驗部分

1．1 儀器、試劑與材料

ＬＣ－20ＡＤＸＲ 高效液相色譜儀 （日本島津公 司）；Ｔｒｉｐｌｅ Ｑｕａｄ 5500 三重四極桿串聯質譜儀（配 ＥＳＩ）（美國 Ｓｃｉｅｘ 公司）；渦旋振蕩器（德國 ＩＫＡ 公 司）；恒溫水浴箱（德國 Ｊｕｌａｂｏ 公司）；昆山舒美KQ-500DE超聲提取器 （昆山市超聲儀器有限公司）；固相萃取裝置（美瑞泰克科技有限公司）；超純水機 （美 國 Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ 公司） 匹可硫酸鈉標準品（純度 96％，加拿大 ＴＲＣ公 司）；乙腈、甲醇（色譜純，美國 Ｈｏｌｌｙ 公司）；乙酸 銨、氨水（含量 25％ ～28％）、無水乙醇、三氯乙酸（分 析純，廣州化學試劑廠）；聚酰胺柱 （1 000 ｍｇ ／ 6 ｍＬ，美國 Ｔｈｅｒｍｏ 公司）。氨水－70％ 乙醇混合溶液： 量取 100 ｍＬ 氨水與 900 ｍＬ 70％ （ｖ ／ ｖ）乙醇水溶液 混勻。1％ 三氯乙酸溶液：稱取 10 ｇ 三氯乙酸溶于 1 000 ｍＬ 水中。 152 批次酵素食品收集于風險監測任務、飛行 檢查和科研網購。提取考察實驗用樣品采用陰性樣 配制，均一化稱量后，果凍、軟糖高溫熔融時加入少 量標液，放冷備用；蜜餞、固體飲料加入少量標液，放 置半小時后備用。

1．2 標準溶液的配制

準確稱取 10 ｍｇ 匹可硫酸鈉標準品，用水配成 1 000 ｍｇ ／ Ｌ 的標準儲備液，4 ℃下保存 3 個月。準 確量取適量標準儲備液，用水配成 5 ｍｇ ／ Ｌ 的標準 使用液，4 ℃下保存 2 周。取適量標準使用液，用水 配成匹可硫酸鈉質量濃度為 5 ～ 500 μｇ ／ Ｌ 的標準曲 線溶液，臨用新配。

1．3 樣品前處理

1．3．1 提取

取適量樣品，采用搗碎、剪碎、研磨等方式充分 粉碎或混合均勻后備用。 果凍、軟糖：準確稱取 1 ｇ 樣品于 50 ｍＬ 離心管 中，加入 40 ｍＬ 水，80 ℃下水浴至樣品溶解，取出放 冷至室溫，轉移至 50 ｍＬ 容量瓶，用 5 ｍＬ 水洗滌離 心管，洗滌液并入同一容量瓶，加入 5 ｍＬ 1％ 三氯乙 酸溶液，用水定容至 50 ｍＬ，待凈化。 蜜餞：準確稱取 1 ｇ 樣品于 50 ｍＬ 離心管中，加 入 40 ｍＬ 水，超聲提取 20 ｍｉｎ，提取液和殘渣轉移 至 50 ｍＬ 比色管，用 5 ｍＬ 水洗滌離心管，洗滌液并 入同一比色管，加入 5 ｍＬ 1％ 三氯乙酸溶液，用水定 容至 50 ｍＬ，待凈化。 固體飲料：準確稱取 1 ｇ 樣品于 50 ｍＬ 離心管 中，加入 25 ｍＬ 水，渦旋分散，80 ℃下水浴 10 ｍｉｎ， 取出放冷至室溫，8 000 ｒ ／ ｍｉｎ 下離心 5 ｍｉｎ，上清液 轉移至 50 ｍＬ 容量瓶。加入 20 ｍＬ 水重復提取一 次，合并兩次上清液。于上清液中加入 5 ｍＬ 1％ 三 氯乙酸溶液，用水定容至 50 ｍＬ，待凈化。 若上述待凈化液渾濁，可取適量在 8 000 ｒ ／ ｍｉｎ 下離心 5 ｍｉｎ，取上清液備用。

1．3．2 凈化

用 10 ｍＬ 水預先活化聚酰胺柱。取 10 ｍＬ 待 凈化液于柱內，待凈化液流盡后，依次用 10 ｍＬ 水、 10 ｍＬ 70％ （ｖ ／ ｖ）甲醇水溶液洗滌，15 ｍＬ 氨水－ 70％ 乙醇混合溶液洗脫，收集洗脫液于 80 ℃下水浴 蒸發至近干，用水定容至 5 ｍＬ，過 0. 22 μｍ 微孔濾 膜，待測。若匹可硫酸鈉濃度超出線性范圍，可用水 適當稀釋。

1．4 色譜－質譜條件

色譜柱：Ｔｈｅｒｍｏ Ａｃｃｕｃｏｒｅ ＲＰ－ＭＳ（100 ｍｍ× 2. 1 ｍｍ，2. 6 μｍ，美國 Ｔｈｅｒｍｏ 公司）；流速：0. 3 ｍＬ ／ ｍｉｎ，乙腈－10 ｍｍｏｌ ／ Ｌ 乙酸銨（15 ∶ 85，ｖ ／ ｖ）等 度洗脫。柱溫 35 ℃，進樣量 5 μＬ。 采用 ＥＳＩ 源，正離子掃描，多反應監測（ＭＲＭ） 模式檢測；電噴霧電壓 5 500 Ｖ，離子源溫度 550 ℃； 霧化氣壓力：3. 447×105 Ｐａ，氣簾氣壓力 2. 759×105 Ｐａ，碰撞氣壓力 6. 207×104 Ｐａ。匹可硫酸鈉采集參 數：定量離子對 ｍ ／ ｚ 438. 2 ／ 183. 9，去簇電壓（ＤＰ） 120 Ｖ，碰撞能（ＣＥ）40 Ｖ；定性離子對 ｍ ／ ｚ 438. 2 ／ 278. 2，ＤＰ 120 Ｖ，ＣＥ 28 Ｖ。

2 結果與討論

匹可硫酸鈉為新發現的非法添加成分，需進行 確證實 驗。采 用 Ｑ Ｅｘａｃｔｉｖｅ 高 分 辨 質 譜 （美 國 Ｔｈｅｒｍｏ 公司）采集有證標準品和可疑樣品中匹可 硫酸鈉色譜峰的質譜信息。色譜圖中，可疑樣品檢 出與標準品保留時間一致的色譜峰；一級質譜圖中， 正離 子 模 式 下 標 準 品 母 離 子 精 確 質 量 數 為 438. 030 15，樣品為 438. 030 18，兩者質量偏差小于 0. 000 05；在二級圖譜中有 3 個相同的碎片離子。 上述結果表明，兩者為同一物質，檢出成分確證為匹 可硫酸鈉。匹可硫酸鈉水溶性極好，宜采用水或與水混溶 的溶劑提取，選取水、甲醇和乙腈進行比對。參考果 凍、蜜餞、固體飲料常用的提取方式，選擇水浴 和超聲進行比較。提取溶劑與提取方式相互組合， 形成 6 種方式，考察對應的提取效果。 結果表明：
（1）采用水－水浴提取時，4 種基質的回收 率均大于 98％；
（2）含有乙腈的組合對各種基質提 取均不理想；
（3）甲醇對軟糖的提取較差；
（4）果凍、 軟糖、固體飲料采用水浴提取優于超聲，蜜餞兩者提 取的效果相當。分析原因，甲醇、乙腈使軟糖變性、 固體飲料結塊，導致目標物包埋，不利于提取。常溫 下軟糖、果凍溶解不完全，含淀粉、奶精的固體飲料 呈稀糊狀，不利于目標物分散。進一步優化發現，蜜 餞在提取時已充分剪碎，被水浸泡存在吸水發脹問題，超聲較水浴的發脹程度小，所以蜜餞更適于采用 超聲提取。

3 結論

建立了高效液相色譜－串聯質譜測定酵素 食品中匹可硫酸鈉的方法。目標物采用水作為提取 溶劑，經水浴或超聲提取，聚酰胺凈化。方法的線性 范圍、檢出限、回收率和精密度滿足非法添加檢測要 求，特別適合果凍、軟糖、蜜餞和固體飲料基質酵素 食品中匹可硫酸鈉的定性、定量分析，靈敏度高、抗 干擾能力強，準確可靠。該方法能彌補現時酵素食 品中匹可硫酸鈉的檢測空白，有一定的實用意義。



 

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