純化黃精總皂苷提取物工藝(KQ-AS-1000GVDE使用)

黃精（Polygonatum sibiricum Red.）為百合科黃 精屬多年草本植物，富含甾體皂苷、糖類、醌類、氨 基酸和微量元素等化學(xué)物質(zhì)，其干燥根莖可藥用，具 有補氣養(yǎng)陰、健脾益腎之功效。現(xiàn)代藥理學(xué)大量研 究表明黃精皂苷具有調(diào)節(jié)人體血糖、拮抗腫瘤、保護 缺血心肌細胞、增強人體免疫力和改善學(xué)習(xí)和記憶作 用，使得近年以其為原料的保健食品在各類市場銷 售日益火爆。雖然前人已對其提取、分離開展大量研 究，但提取物中雜質(zhì)仍然影響其保健功效的發(fā)揮。

1　材料與方法

1.1　材料與試劑

黃精材料（云南楚雄和康中草藥有限公司，經(jīng)廣 西藥用植物園鑒定為百合科黃精屬黃精根莖）。 薯蕷皂苷元標準品（批號11539，定量分析用， 中國食品藥品檢定研究院）；乙醇、石油醚、香草 醛、高氯酸、冰醋酸、正丁醇、甲醇（分析純，國藥 集團化學(xué)試劑有限公司）；試驗用水為二次純化水。

1.2　儀器與設(shè)備

WF-20 B型高速多功能粉碎機（江陰市中恒元機 械制造有限公司）；AE 224型電子天平（上海舜宇恒 平科學(xué)儀器有限公司）；RE-52 S型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上 海亞榮生化儀器廠）；昆山舒美KQ-AS-1000GVDE型雙頻恒 溫數(shù)控超聲機（昆山舒美超聲儀器有限公司）；L6S 型紫外-可見分光光度計（上海儀電分析儀器有限公 司）；微量移液器（賽默飛世爾科技（中國）有限 公司）；FD-1 B-50型冷凍干燥機（上海比朗儀器制 造有限公司）；水浴恒溫振蕩器（常州市神科儀器 廠）；AB-8型大孔樹脂（天津市西金納環(huán)保材料科 技有限公司）；D-101、XDA-5型大孔樹脂（天津浩 聚樹脂科技有限公司）；LSA-10、LSA-30、LSA-40 型大孔樹脂（陜西藍深特種樹脂有限公司）。

1.3　方法

1.3.1　提取物制備

取干燥的黃精根莖粉碎至完全，過65目篩，稱取 10 g，加入200 mL石油醚置于超聲裝置內(nèi)于40 ℃超聲 40 min后過濾，濾渣加入80 mL、80%乙醇溶液溶解 后，于40 ℃繼續(xù)超聲40 min過濾，濾液蒸干，加入0.5 mol/L、100 mL鹽酸溶解后，置于分液漏斗，分別加入 80 mL正丁醇提取3次，合并正丁醇，蒸干，冷凍干燥 備用。

1.3.2　標準曲線

精密稱取干燥恒質(zhì)量的薯蕷皂苷元標準品0.010 0 g，采用甲醇稀釋至1.0 mg/mL，分別移取0.05，0.10， 0.30，0.50和2.00 mL至具塞試管內(nèi)，水浴蒸干甲醇 后，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL和0.8 mL高氯 酸，搖勻置于水浴中加熱15 min后，加入5 mL冰醋 酸，搖勻，以相應(yīng)試劑作空白，于560 nm最大吸收 波長處測定吸光度，繪制薯蕷皂苷濃度（X）-吸光 度（Y）的標準曲線，線性方程為y=0.126x+0.011 7 （r=0.996 4），可知皂苷質(zhì)量濃度于0.008 3~0.33 mg/ mL范圍內(nèi)，吸光度與其呈良好線性關(guān)系。

2　結(jié)果與分析

準確稱取黃精皂苷提取物0.50 g，采用甲醇溶液 定容于10 mL容量瓶中，精密移取1 mL至具塞試管 內(nèi)，水浴蒸干甲醇后，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL和0.8 mL高氯酸，搖勻置于水浴中加熱15 min，另加 入5 mL冰醋酸，搖勻，以相應(yīng)試劑作空白，于560 nm 波長處測定吸光度，平行測定3次，代入標準曲線 方程，計算提取物中總皂苷含量。AB-8型大孔樹脂靜態(tài)吸附-洗脫黃 精皂苷類化合物的回收率高于其他5種樹脂，達到 73.18%。這可能歸因于皂苷類化合物結(jié)構(gòu)主要含有糖 基，如半乳糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸及海藻糖等，而 AB-8型大孔樹脂特殊的非極性空間結(jié)構(gòu)，恰好能與 其產(chǎn)生較好的物理吸附作用，因此選擇AB-8型大孔 樹脂作為純化黃精皂苷提取物的吸附樹脂。上樣液質(zhì)量濃度0.5 mg/mL時，樹脂 對黃精皂苷的吸附率達到86.8%，繼續(xù)增大上樣液濃 度，吸附率開始下降，因此選擇0.3，0.5和0.7 mg/mL 作為上樣液質(zhì)量濃度的響應(yīng)因素水平。流出液中皂苷濃度為上樣液濃度的10%，稱為樹 脂吸附泄漏點，而達到上樣液濃度的100%時則稱為 樹脂吸附飽和點，不同上樣液體積對樹脂吸附皂苷 的影響。

3　結(jié)論

以紫外-可見分光光度法為定量分析手段，通過 考察不同型號大孔樹脂的靜態(tài)吸附-洗脫性能和單因素改變影響，對上樣液濃度、上樣流速、洗脫液濃 度、洗脫流速進行三水平四因素的響應(yīng)面優(yōu)化，利用 Design-Expert 8.0軟件分析，得到大孔樹脂純化黃精 皂苷提取物的最佳工藝條件為：體積60 mL的0.57 mg/ mL黃精總皂苷提取液，以2.0 mL/min流速上樣至AB-8 型大孔樹脂內(nèi)，隨后采用體積為90 mL的80.81%乙醇 溶液，以1.62 mL/min流速洗脫，黃精皂苷回收率為 73.62%，純化后產(chǎn)物中總皂苷含量為純化前2.71倍。

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