測定銀翹解毒丸中5種成分(KQ-500DV使用)

銀翹解毒丸處方源于銀翹散，銀翹 散出自我國清代著名醫家吳瑭所著的《溫 病條辨》一書，演變于金元四大醫學家之一李東垣的清心涼膈散。原文記載的本 方藥物組成為“銀花一兩，連翹一兩，苦 桔梗六錢，薄荷六錢，竹葉四錢，生甘草 五錢，荊芥穗四錢，淡豆豉五錢，牛蒡子 六錢，用鮮蘆根湯煎煮后服用”。

1 儀器

XS205DU電子天平（0.01mg，美國 梅特勒公司）；昆山舒美KQ-500DV 超聲波清洗器 （昆山市超聲儀器有限公司）；LC-20A 高效液相色譜儀（配置在線真空脫氣裝 置、四元梯度泵、自動進樣器、柱恒溫 箱、SPD-20A紫外檢測器，日本島津公 司）。

2 試藥

綠原酸（含量96.6%，批號110753- 201314）、連翹苷（含量95.3%，批號 110821-201213）、牛蒡苷（含量95.7%， 批號110819-201309）、甘草苷（含量 93.7%，批號111610-201106）、甘草酸 銨（含量92.6%，批號110731-201317）對 照品均購自中國食品藥品檢定研究院；銀 翹解毒丸（水蜜丸）（每100粒重10g）購 自北京同仁堂科技發展股份有限公司制藥 廠；甲醇、乙腈均為色譜純（美國Fisher Scientific公司）；水為超純水。

3 方法與結果

3.1 色譜條件

ThermoC18色譜柱（4.6mm ×250mm，5μm），流動相A為乙腈，B為0.5%磷酸，梯度洗脫（0～8min，5%A；8～12min，5%→15%A； 12～30min，15%A；30～50min， 15%→40%A；50～60min，40%→60%A； 60～70min，60%→100%A；70～80min， 100%→5%A），體積流量0.8mL/min；檢 測波長230nm；柱溫25℃；進樣量供試品 溶液10μL，對照品溶液5μL。

3.2 對照品溶液制備

精密稱取連翹苷對 照品5.42mg置10mL量瓶中，用甲醇溶解 并稀釋至刻度，搖勻，制成連翹苷對照 品貯備液；再分別精密稱取綠原酸對照 品8.14mg，牛蒡苷對照品10.12mg，甘草 苷對照品2.51mg，甘草酸銨對照品7.91mg 置同一50mL量瓶中，并精密加入上述 連翹苷對照品貯備液1mL，用甲醇溶解 并稀釋至刻度，搖勻，即得每1mL含綠 原酸0.1573mg，連翹苷0.0103mg，牛蒡 苷0.1937mg，甘草苷0.0470mg，甘草酸 0.1435mg（甘草酸重量=甘草酸銨重量 /1.0207）的混合對照品溶液。

3.3 供試品溶液制備

取銀翹解毒丸（水 蜜丸）適量，研細，取約1.0g，精密稱 定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲 醇25mL，密塞，稱定重量，超聲提取 30min，放冷，用70%甲醇補足減失的重 量，搖勻，濾過（0.45μm微孔濾膜），取 續濾液作為供試品溶液。 3.4 陰性樣品溶液制備 按銀翹解毒丸（水 蜜丸）處方及工藝，制備金銀花陰性樣 品、連翹陰性樣品、牛蒡子陰性樣品和甘 草陰性樣品，再按“3.3”項下方法分別制 備金銀花陰性供試品溶液、連翹陰性供試 品溶液、牛蒡子陰性供試品溶液和甘草陰 性供試品溶液。

4 討論

4.1 流動相選擇

在流動相的選擇上， 選取乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸溶液、乙 腈-0.2%磷酸溶液、乙腈-0.5%磷酸溶液 等溶劑系統，分別測定同一供試品溶液中 5種被測成分的峰面積。在乙腈-0.5%磷 酸溶液流動相系統，梯度洗脫的色譜條 件下，綠原酸、牛蒡苷、連翹苷、甘草 苷和甘草酸分離效果良好，峰形較好， 在60min 內就能實現良好的分離。確定乙 腈-0.5%磷酸溶液為流動相系統。

4.2 檢測波長選擇

在檢測波長的選擇上， 取5種被檢測成分綠原酸、連翹苷、牛蒡苷、甘草苷和甘草酸（以甘草酸銨計）的 對照品，分別加甲醇配制成對照品溶液， 在200～400nm波長范圍內掃描測定紫外吸 收光譜，測得各成分的最大吸收波長，通 過分析比較，選取230nm、250nm、280nm 作為備選檢測波長。在備選檢測波長下分 別測定同一供試品溶液中5種被測成分的 峰面積。為保證5種被測成分均有較大吸 收，確定檢測波長為230nm。

4.3 柱溫選擇

分別考察了25℃、30℃、 40℃柱溫時對樣品峰形、保留時間、分離 度的影響，最終選擇25℃作為最佳柱溫。

5 結論

該實驗采用HPLC法同時測定銀翹解 毒丸（水蜜丸）中綠原酸、連翹苷、牛蒡 苷、甘草苷、甘草酸含量的方法，操作簡 便、專屬性強、結果可靠，能快速、直觀 和全面地反映銀翹解毒丸（水蜜丸）內在 質量，可應用于銀翹解毒丸（水蜜丸）的 質量控制及生產過程質量控制。



 

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