測定鉤藤中鉤藤堿和異鉤藤堿的含量（KQ-250DB使用

中藥鉤藤為茜草科植物鉤藤[Uncaria rhynchophylla（Miq.）Miq. exHavil.]、大葉鉤藤（Uncaria macrophylla Wall.）、毛鉤藤（Uncaria hirsuta Havil.）、華鉤藤[Uncaria sinensis（Oliv.）Havil.]或無柄果鉤藤（Uncaria sessilifructus Roxb.）的干燥帶鉤莖枝，多于秋、冬二季采收， 去葉，切段，曬干 。鉤藤，原名“釣藤”，始載于《名醫別 錄》，主要用于肝風內動、驚癇抽搐、高熱驚厥、感冒夾 驚、小兒驚啼、妊娠子癇、頭痛眩暈 。其主要化學成分 有生物堿、三萜、木脂素、黃酮等成分 ，尤以生物堿在 鉤藤中含量較多 ，其中鉤藤堿（Rhynchophylline）含量 占總堿的28％～50％，異鉤藤堿（Isorhynchophylline）含 量約占總堿的15％，二者具有顯著的降壓、鎮靜、安眠、 解痙等作用 ，因此，筆者選擇以鉤藤堿和異鉤藤堿作 為鉤藤質量評價指標能較有效地控制其藥材質量。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 1260 HPLC儀（美國Agilent公司）；Shimadzu LC-20AT HPLC 儀（日本島津公司）；Waters e26953 HPLC 儀（美國 Waters 公司）；Dikmatech Diamonsil PlusC18（美國 Dikma Technologies 公司，250 mm×4.6 mm，5 μm，柱號：2509215，）；Hypersil ODS C18（大連依利特分 析儀器有限公司，柱號：2912645，250 mm ×4.6 mm，5 μm）；Agilent HC- C18（美國Agilent Technologies公司，柱 號：538639，250 mm×4.6 mm，5 μm）；MS105DU 十萬分 之一天平（瑞士Mettler tolerdo公司）；昆山舒美KQ-250DB數控超 聲波清洗器（江蘇省昆山市超聲儀器有限公司）； PHS-25 PH計（上海霄盛儀器制造有限公司）；FY-1H旋 片式真空泵（浙江飛越機電有限公司）；103B 200 g高速 中藥粉碎機（浙江省瑞安市永歷制藥機械有限公司）。

1.2 藥品與試劑

試驗用藥材采收于江西省的安義、資溪、黎川、寧都 4個縣，每個縣各采了2批，安義縣批號：181205、181206， 資 溪 縣 批 號 ：181208、181209，黎 川 縣 批 號 ：181211、 181212，寧都縣批號：181214、181215，上述各藥材均為野 生，采收時間為2018年12月，經江西省中醫藥研究院虞 金寶研究員鑒定為鉤藤；鉤藤堿對照品（批號：B20453， 純度：≥98％）、異鉤藤堿對照品（批號：B21526，純度：≥ 98％）、C4mimCl（批號：S50839，純度：≥97％），均購于上 海源葉生物科技有限公司；乙腈和甲醇均為色譜純，磷 酸、三乙胺、氫氧化鈉、乙醇均為分析純，水為娃哈哈純 凈水（杭州娃哈哈集團有限公司）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Dikmatech Diamonsil Plus C18（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-緩沖液（0.1％磷酸+ 3.0 mmol/L C4mimCl 或 3.0 mol/L 三乙胺）（B），pH 約為 2.3；檢測波長：245 nm；流速：1 mL/min；柱溫：25 ℃；進 樣量：10 μL；梯度洗脫（0～15 min，8％→35％A；15～17 min，35％→43％A；17～19 min，43％→44％A；19～30 min，44％→90％）。

2.2 混合對照品溶液的制備

精密稱取鉤藤堿 12.16 mg 和異鉤藤堿 9.92 mg，分 別置于10 mL量瓶中，加乙醇溶解并定容，搖勻，得鉤藤 堿對照品貯備液和異鉤藤堿對照品貯備液。再精密吸 取鉤藤堿對照品貯備液1 mL和異鉤藤堿對照品貯備液 2 mL 置于 100 mL 量瓶中，加 60％甲醇稀釋至刻度，搖 勻，制成每1 mL分別含鉤藤堿12.16 μg、異鉤藤堿19.84 μg的混合對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

分別取過 3 號篩的鉤藤粉末約 0.5 g，精密稱定，置 于具塞錐形瓶中，精密加入60％甲醇50 mL，稱定質量， 室溫浸泡1 h；然后超聲提取30 min（功率：250 W，頻率： 40 kHz），放冷，再稱定質量，用60％甲醇補足減失的質 量，搖勻，濾過，取續濾液，0.22 μm微孔濾膜過濾，得供 試品溶液。

2.4 流動相添加劑的選擇

按照“2.1”項下色譜條件，取批號為181206的安義縣鉤藤供試品溶 液進樣，比較不含添加劑的流動相以及在流動相中添加 劑分別為三乙胺（3.0 mmol/L）和 C4mimCl（3.0 mmol/L） 時的分離效果。

3 討論

3.1 檢測波長

通過光譜全波長掃描發現，鉤藤堿和異鉤藤堿在檢 測波長為245 nm波長處均有最大吸收，因此將檢測波長 定為245 nm。

3.2 有機相的選擇

分別考察相同有機相比例下甲醇和乙腈對2種成分 分離效果的影響。結果發現，與乙腈為有機相比較，用 甲醇時鉤藤堿和異鉤藤堿出峰時間延后近 7 min，且峰 形較差，因此本試驗選用乙腈為有機相。

3.3 含量測定結果分析

本試驗采用離子液體 C4mimCl 做流動相添加劑測 定了江西不同產地的野生鉤藤中鉤藤堿和異鉤藤堿的 含量，江西不同產地野生鉤藤中均含有鉤藤 堿和異鉤藤堿，但各產地樣品中鉤藤堿和異鉤藤堿的含 量差異均較大，來自贛北地區（安義縣）的鉤藤堿和異鉤 藤堿含量相對較高，筆者推測氣候環境、土壤性質對野生鉤藤中鉤藤堿和異鉤藤堿的含量有一定影響。后期， 筆者將收集江西更多產地的野生鉤藤、栽培鉤藤、野生 撫育鉤藤對其有效成分含量進行測定，為江西鉤藤藥材 合理布局與生產管理提供依據。



 

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