測定如意金黃散中歐前胡素的含量（KQ2200E使用）

如意金黃散為中藥復方制劑，外觀為黃色至金 黃色的粉末，氣微香，味苦、微甘。由大黃、白芷、黃 柏、天花粉等多味藥組成，具有活血散瘀、消腫止 痛、抗炎滅菌之功效，可用于治療靜脈炎、兒童腮腺 炎、下肢丹毒等癥，對糖尿病的并發(fā)癥、肛腸性疾病的治療亦有積極意義。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

LA-20AT 型高效液相色譜儀（日本島津公司）； FA1604N 型電子天平 （南京信展科技有限公司）； 昆山舒美KQ2200E 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公 司）；TU-1810 型紫外可見分光光度計（北京普析通 用儀器有限責任公司）；DHG-9140A 型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司）。 歐前胡素 （中國藥品生物制品鑒定所，批號 110826-201616）；乙腈、甲醇（色譜純，國藥集團化 學試劑有限公司）；二次蒸餾水；如意金黃散（江蘇 707 天然制藥有限公司）。

1.2 色譜條件

色譜柱：InertSustain C18（150mm×4.6mm，5μm）； 流動相：乙腈-水（48∶52，體積比）；流速：1.0mL·min-1 ； 檢測波長：254nm；柱溫：室溫；進樣量：20μL；光譜 掃描范圍 220~500nm。理論塔板數(shù)按歐前胡素標準 品計算不低于 7700。

1.3 測定方法

1.3.1 對照品溶液的制備

精密稱取經 P2O5 減壓 干燥后的歐前胡素對照品 11.1mg，置于 100mL 的 棕色容量瓶中，加甲醇使之溶解，并定容至刻度，搖 勻，配得質量濃度為 111μg·mL-1 的對照品儲備液。

1.3.2 供試品溶液的制備

取如意金黃散約 1g，精 密稱定，加入甲醇 50mL，稱重，室溫下超聲處理 30min，取出放冷，甲醇補足至原質量，過濾，棄去初 濾液，剩余濾液再經 0.45μm 微孔濾膜濾過，制得供 試品溶液備用。

2 結果與討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 檢測波長

取對照品溶液適量，在 220～ 500nm 波長范圍內進行掃描，發(fā)現(xiàn)對照品溶液在 301nm 和 254nm 處有兩個吸收峰。根據(jù)色譜圖顯 示，采用 254nm 作為檢測波長，基線更穩(wěn)定，干擾 少，分離度好，且有較高的峰面積和峰高值，故選擇 254nm 作為檢測波長。

2.1.2 流動相及流速選擇

實驗考察了 4 種流動 相系統(tǒng)即甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.3% H3PO4 溶液 以及甲醇-0.3% H3PO4 溶液，對 HPLC 分離效果的 影響。結果表明，選用乙腈-水（48∶52，體積比）為流 動相進行等度洗脫，所得色譜峰峰形良好，理論塔 板數(shù)較高。中藥制劑如意金黃散的藥味較多，成分復雜，因而吸收峰較多，選用 301nm 作為特征吸收 峰，發(fā)現(xiàn)有其它物質的干擾，故選擇 254nm 作為檢 測波長。流速的快慢選擇對峰形及分析結果有一定 影響，選擇低流速時色譜峰的分離效果好，但會導致 目標物出峰時間延長，實驗通過對 （0.8、1.0、1.2mL· min- ）1 流動相流速的考察，確定最終流速為 1.0mL· min-1 。

2.1.3 專屬性實驗

取配制好的歐前胡素對照品 溶液和供試品溶液，按 1.2 色譜條件進樣分析，記錄 圖譜。對照品圖譜見圖 1，供試品圖譜見圖 2。由圖譜分析可知，供試品和對照品中歐前胡素 吸收峰的保留時間相同，且實驗條件下歐前胡素與 其它組分分離完全。

2.2 線性關系考察

取 6 支 25mL 的容量瓶，分別精密移入對照品 儲備液 0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，用甲醇稀釋并 定容至刻度。按 1.2 色譜分析條件進樣，以歐前胡素 的質量濃度 C（μg·mL-1 )為橫坐標，峰面積 Y 為縱坐 標，繪制標準曲線，見圖 3。經線性擬合，得回歸方程 為 Y=96089C+3509.5，r=1，表明歐前胡素的進樣量 在 2.22~22.2μg·mL-1 濃度范圍內具有良好的線性 關系。


3 結論

樣品經甲醇提取，通過對色譜條件進行優(yōu)化， 建立了高效液相色譜法測定中藥制劑如意金黃散 中歐前胡素含量的色譜檢測方法。該方法簡便、可 靠、重復性及穩(wěn)定性好，分離效果與專屬性較強，能 為如意金黃散制劑的質量控制提供一定的依據(jù)。



 

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