昆山舒美分析黃酮對照提取物

中藥具有多成分、多靶點作用特點，多成分質量 控制模式已成為中藥質量控制的主要趨勢和重要研 究方向。中藥常用的多成分質量控制模式基本采用以 多種單一對照品作為對照物質進行中藥質量評價，而 多種單一對照品的模式由于存在化學對照品分離難 度大、生產成本及技術要求高、檢測成本昂貴等問題， 在實際應用中受到諸多限制。為解決上述問題，有 研究者提出運用一測多評法開展中藥質量控制，但該 方法在相對校正因子的定量、指標成分的色譜峰定 性，以及方法的適用性和耐用性等方面尚存在一些問 題。因此，建立一種適合多成分中藥質量控制的 方法是解決中藥質量控制問題的有效途徑之一，而運 用中藥對照提取物對中藥進行質量控制，可以在解決 對照品稀缺、多成分同時定量困難等問題方面有較大改善。

SHB-Ⅲ循環水式多用真空泵，鄭州長城科工貿有 限公司；KQ-500DE 型數控超聲波清洗器,昆山舒美超聲儀器有限公司；Waters 高效液相色譜儀（包括 1525 型二元高壓梯度泵系統、2998 型 DAD 檢測器、2414 型柱溫控制系統、2707 型自動進樣系統、Breeze 色譜 工 作 站 ）， 美 國 Waters 公司；穩定性試驗箱 （SHH-GSD），重慶永生實驗儀器廠；Sunfire C18 色 譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；Sartorious BT 25S 型十萬分之一電子分析天平，北京賽多利斯儀器有限 公司。蕓香柚皮苷對照品（批號 MUST-17030408，純度 99.20%）、柚皮苷對照品（批號 MUST-17040102，純 度 98.28%）、新橙皮苷對照品（批號 MUST-17040707， 純度 98.79%），成都曼斯特生物科技有限公司；橙皮 苷對照品（批號 721-860110，純度 98.08%），中國食 品藥品檢定研究院。甲醇（色譜純，Fisher 公司），屈 臣氏純凈水，其他試劑均為分析純。21 批枳實藥材分 別購自不同地區，經北京中醫藥大學劉元艷教授鑒定 為蕓香科植物酸橙 Citrus aurantium L.及其栽培變種 或甜橙 Cirtus sinensis Osbeck 的干燥幼果，來源信息 見表 1。

取枳實藥材（S21），適當破碎（綠豆大），用 8 倍量 70%乙醇（含 0.5%氨水）回流提取 2 次，每次 1.5 h，合并 2 次提取液，減壓濃縮至無醇味，冷凍干 燥，即得提取物浸膏。提取物浸膏加 10 倍量水超聲 （功率 100 W，頻率 40 kHz）分散 30 min，3000 r/min 離心 30 min。殘渣部分冷凍干燥；上清液以 0.5 BV/h 吸附流速通過 AB-8 大孔吸附樹脂柱，以 1 BV/h 洗脫 流速，依次用水洗脫 5 BV、40%乙醇洗脫 4 BV，收 集 40%乙醇洗脫液，減壓濃縮，冷凍干燥，即得 40% 乙醇洗脫部位。殘渣與 40%乙醇洗脫部位合并，即得 枳實黃酮對照提取物。采用 Sunfire C18 色譜柱（4.6 mm×250 mm， 5 μm），流動相為甲醇-水-乙酸（38∶58∶4），流速 1 mL/min，檢測波長 283 nm，柱溫 35 ℃，進樣量 10 μL。

本試驗中，昆山舒美取同一批次枳實藥材，按上述方法分別制備 3 批枳實黃酮對照提取物。所得枳實 黃酮對照提取物中蕓香柚皮苷的含量為 1.65%～ 1.71%，柚皮苷的含量為 31.17%～31.54%，橙皮苷的 含量為 2.35%～2.44%，新橙皮苷的含量為 33.63%～ 33.89%，表明枳實黃酮對照提取物中的化學成分比例 相對固定。在枳實黃酮對照提取物制備工藝研究中發現， 70%乙醇提取物浸膏加水分散后存在水不溶物。 HPLC 含量測定結果顯示水不溶物中柚皮苷、新橙皮 苷含量較高。因此，本試驗考察了加入不同倍量的水 對提取物浸膏分散的影響，結果表明，當加入 10 倍 量水時，水不溶物中柚皮苷、新橙皮苷的含量最高。 針對 70%乙醇提取物浸膏的水溶部分，本試驗選擇 AB-8 大孔樹脂對其黃酮類成分進行富集。依次用不 同濃度乙醇進行洗脫，結果表明 40%乙醇洗脫效果較 好，將水不溶部分與 40%乙醇部位合并即得枳實黃酮 對照提取物。



 

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