KQ2200E在止血調(diào)經(jīng)顆粒指紋圖譜研究的使用

止血調(diào)經(jīng)顆粒（Zhixue Tiaojing Granule，ZTG） 是湖南安邦制藥有限公司具有知識(shí)產(chǎn)權(quán)的獨(dú)家品種，處方由黃芪、阿膠、黨參、白芍、當(dāng)歸、仙鶴 草、茜草、佛手和續(xù)斷 9 味中藥組成，處方來(lái)源于阿膠養(yǎng)血膏加減，具有益氣養(yǎng)血、止血調(diào)經(jīng)功能， 用于上環(huán)所致經(jīng)期延長(zhǎng)氣血兩虛證者，癥見(jiàn)經(jīng)血過(guò) 期不凈、月經(jīng)色淡、神疲乏力、頭暈眼花、少腹墜 脹、色淡、苔薄白、脈細(xì)弱。

賽默飛 UltimateTM U3000 系列高效液相色譜 儀，色譜軟件為 Chromeleon Chromatography Data System7.2；AE100 型電子分析天平，十萬(wàn)分之一， Mettler Toledo 公司；KQ-2200E 型超聲波清洗儀， 昆山市超聲儀器有限公司。

乙腈、甲醇，色譜純，Sigma-Aldrich 公司；PLSW Series 超純水，青海藍(lán)天有限公司；對(duì)照品芍藥苷 （批號(hào) 110736-201842）、毛蕊異黃酮葡萄糖苷（批 號(hào) 111920-201606 ）、芒柄花素（批號(hào) 111703- 201504），中國(guó)食品藥品檢定研究院。黃芪、黨參、 白芍、當(dāng)歸、仙鶴草、茜草、佛手和續(xù)斷 8 味藥材 均由湖南安邦制藥有限公司提供，所有藥材經(jīng)湖南 安邦制藥有限公司分析質(zhì)量中心楊勇研究員鑒定為 豆科黃芪屬植物蒙古黃芪 Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge. var. mongholicus (Bge.) Hsiao 的干燥 根、桔梗科黨參屬植物黨參 Codonopsis pilosula (Franch.) Nannf. 的干燥根、毛茛科芍藥屬植物芍藥 Paeonia lactiflora Pall. 的干燥根、傘形科當(dāng)歸屬植 物當(dāng)歸 Angelica sinensis (Oliv.) Diels 的干燥根、薔薇科龍牙草屬植物龍芽草 Agrimonia pilosa Ledeb. 的干燥地上部分、茜草科茜草屬植物茜草 Rubia cordifolia L. 的干燥根和根莖、蕓香科柑桔屬植物 佛手 Citrus medica L. var. sarcodactylis Swingle 的干 燥果實(shí)和川續(xù)斷科川續(xù)斷屬植物川續(xù)斷 Dipsacus asper Wall. ex Henry 的干燥根。 10 批次 ZTG 樣品由湖南安邦制藥有限公司研 制生產(chǎn)，具體批號(hào)為 20180301（S1）、20180302（S2）、 20180303（S3）、20180601（S4）、20180602（S5）、 20180603（S6）、20180604（S7）、20181001（S8）、 20181002（S9）、20181003（S10）。

色譜柱為 Thermo AcclaimTM 120 C18 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為純水-乙腈；梯度 洗脫：0～5 min，5%乙腈；5～40 min，5%～35% 乙腈；40～60 min，35%～95%乙腈；檢測(cè)波長(zhǎng) 254 nm；柱溫 30 ℃；體積流量 1 mL/min；進(jìn)樣量 10 μL； 理論塔板數(shù)以芍藥苷計(jì)不低于 50 000。

精密稱取芍藥苷、毛蕊 異黃酮葡萄糖苷和芒柄花素對(duì)照品適量，用甲醇溶 解并定容，配成含芍藥苷質(zhì)量濃度為 1.90 mg/mL、 毛蕊異黃酮葡萄糖苷質(zhì)量濃度為 1.55 mg/mL 和芒 柄花素質(zhì)量濃度為 0.59 mg/mL 的對(duì)照品溶液。

取 ZTG 適量，取約 2.5 g，精密稱定，至 25 mL 錐形瓶中，精密加入甲醇 20 mL，稱量，超聲提取 30 min 后，放冷，用甲醇 補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻靜止，取上清液過(guò) 0.22 μm 微孔濾膜，取濾液，即得。

精密吸取同一 ZTG（S1）供試 品溶液 10 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè) 定 6 次，記錄其色譜圖。以 4 號(hào)峰（芍藥苷）為參照，計(jì)算 11 個(gè)共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面 積，結(jié)果表明，各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰 面積的 RSD 分別為 0.02%～0.10%和 0.38%～ 7.85%，其中，芍藥苷和毛蕊異黃酮葡萄糖苷峰面 積 RSD 分別為 3.18%和 1.28%，表明儀器精密度良 好，符合指紋圖譜的要求。

取 ZTG（S1）6 份，精密稱定， 按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密吸取供 試品溶液 10 μL，分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。以 4號(hào)峰（芍藥苷）為參照峰，計(jì)算 11 個(gè)共有峰的相對(duì) 保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，結(jié)果表明，各特征峰的相 對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的 RSD 分別為 0.01%～ 0.14%和 1.16%～9.81%。而芍藥苷和毛蕊異黃酮葡 萄糖苷峰面積 RSD 分別為 3.41%和 1.96%，結(jié)果表明，該方法重復(fù)性好。

考察了以水及 30%、50%、80%、100% 甲醇作為提取溶劑，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，樣品在含有水為溶 劑的提取液中，提取的溶劑為棕褐色的，而甲醇提 取液為棕黃色，各提取溶劑提取后的溶液均有不溶 物，含有水為溶劑的提取液無(wú)法通過(guò) 0.45 μm 的針 式過(guò)濾膜，必須經(jīng)過(guò) 10 000 r/min、10 min 的離心之 后才能夠?yàn)V過(guò)，給樣品前處理造成困難，且圖譜由 于含有雜質(zhì)較多，基線偏移度較大，因此綜合考慮， 選用甲醇作為提取溶劑。采用了DAD全波長(zhǎng)掃描的方式，通過(guò)3D圖譜， 可以看出樣品的峰面積均不太明顯，提取出 220、 240、254、270、300 nm 等波長(zhǎng)下的圖譜進(jìn)行比較， 發(fā)現(xiàn)在 220 nm 等較低的波長(zhǎng)段，基線不平穩(wěn)，漂 移度大，在 270 nm 較高波長(zhǎng)段的中間洗脫段的峰 形較差，綜合考慮，選取 254 nm 綜合性較好的波 長(zhǎng)為檢測(cè)波長(zhǎng)。在流動(dòng)相選擇過(guò)程中，考慮到中藥復(fù)方制劑成 分復(fù)雜，乙腈的洗脫能力較甲醇強(qiáng)，且使用乙腈做 流動(dòng)相，色譜柱壓力更低，有利于延長(zhǎng)色譜柱的使 用壽命，最后選定乙腈做有機(jī)相洗脫。



 

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