KQ500DB在斑馬魚的毒性效應分析中的使用

五氟磺草胺是由美國陶氏益農公司于2004年開發 上市的三唑并嘧啶磺酰胺類除草劑，是水稻田常用除草 劑，其作用廣譜，對多種闊葉雜草和水生雜草高效， 作用方式為苗后除草。由于農藥施用后，會隨著灌溉等農事操作進入環境，對環境具有一定程度的潛在危害， 并對環境中的非靶標生物(如水環境中的魚類、藻類；土 壤中的蚯蚓、微生物等)具有一定的毒性效應。

GXZ型智能光照培養箱 (寧波江南儀器廠)；KQ500DB型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)； FA2004A電子天平(上海精天電子儀器有限公司)；Thermo 移液槍；Nexcope數碼生物顯微鏡NE930；Waters ACQUITY UPLC-H-Class Xevo-TQS Micor超高效液相色譜-串聯質 譜，配有電噴霧離子源(ESI)(美國Waters公司)。 96%五氟磺草胺(武漢遠成共創科技有限公司)；超純水。

將斑馬魚3月齡幼魚移入裝有2 L藥液的大燒杯中， 每處理10尾魚，不設重復。處理后24、48、72、96 h，對五氟 磺草胺藥液質量濃度進行取樣檢測有效成分含量，觀察 記錄各藥液質量濃度下幼魚的死亡情況和中毒癥狀。

將供試胚胎用吸管移入裝有2 mL藥液的24孔板中， 每孔1枚胚胎，每質量濃度處理20枚胚胎。處理后6、24、 48、72、96 h，用生物顯微鏡觀察各藥液質量濃度下胚胎 的發育情況，并拍照記錄。

參照GB/T 31270.12—2014，采用靜態法進行試驗， 觀察并記錄幼魚中毒癥狀及死亡率。

液相條件：色譜柱，ACQUITY UPLCTM BEH C18(50 mm× 2.1 mm 1.7 μm)；流速：0.35 mL/min；柱溫：35 ℃；進樣體 積：2 μL；總運行時間4.5 min。流動相A為0.1%甲酸水(v/v)， B為乙腈；洗脫梯度：0~2 min，90%~2% A；2~3 min，2% A； 3~3.01 min，2%~90% A；3.01~4.5 min，90% A。 質譜條件：毛細管電壓為3.0 kV；脫溶劑溫度為550 ℃； 離子源溫度為150 ℃；脫溶劑氣流速為1000 L/h；錐孔反 吹氣為30 L/h；離子掃描模式為ESI+ ；離子監測模式為多 反應離子監測。

經液質聯用儀檢測，五氟磺草胺各質量濃度藥液實 測含量均大于理論濃度的80%。由表1可知：五氟磺草胺 對斑馬魚3月齡幼魚96 h的LC50值為4.38 mg/L，95%置信 限為4.07～4.70 mg/L，毒性等級為中毒。

2.2 對斑馬魚胚胎毒性效應

2.2.1 對斑馬魚胚胎毒性及死亡率的影響

五氟磺草胺對斑馬魚胚胎96 h的 LC50值為34.37 mg/L，95%置信限為16.32～72.38 mg/L，對 斑馬魚胚胎造成危害的最低質量濃度為5 mg/L，處理組 24 h白卵率與藥液存在質量濃度相關性。

以五氟磺草胺水溶液處理胚胎后，處理組胚胎孵化 時間較對照均有延遲，48 h時對照孵化了50%，2.5 mg/L 質量濃度下孵化了10%，其他質量濃度組均未孵化。

72 h時50 mg/L以上質量濃度處理的 胚胎，發生少量畸形，少量無法孵化出卵殼，心跳數較對 照降低；對照組胚胎正常發育，72 h的初孵幼魚正常，分 化結構清晰可見，生命活動正常；處理組部分白卵，且處 理組72 h部分胚胎未孵化，未孵化的幼魚體心包囊腫，有 一定畸形，自主運動較對照緩慢。

本研究采用斑馬魚作為模式生物，分別就五氟磺草 胺對3月齡幼魚、胚胎和初孵幼魚毒性效應進行了測定 和觀察。試驗結果表明：五氟磺草胺對斑馬魚3月齡幼魚毒性等級為中毒，對斑馬魚胚胎和初孵幼魚均為低毒， IUPAC網站數據表明：該藥劑對虹鱒魚96 h的LC50值大于 100 mg/L，為低毒，可能由于供試用魚品種和大小不一 致，造成的結果會有一定的差異；五氟磺草胺對斑馬魚 胚胎造成危害的最低質量濃度為5 mg/L，處理胚胎白卵 率增多，孵化時間有延遲，72 h處理胚胎自主運動慢，且 高質量濃度處理組出現少量畸形，少量無法孵出卵殼， 心跳也比對照緩慢。



 

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