KQ-300DV用于鹽酸林可霉素注射液的分析改進(jìn)

鹽酸林可霉素又稱鹽酸潔霉素，鹽酸林可霉素注射液 屬于人畜共用藥，主要用于治療革蘭陽性菌和支原體感染。 對葡萄球菌、溶血性鏈球菌抑制作用較強(qiáng)，對厭氧菌如破 傷風(fēng)梭菌、產(chǎn)氣莢膜芽孢桿菌有抑制作用，對豬痢疾密螺 旋體和弓形蟲也有一定作用。主要作用于細(xì)菌核糖體的 50 s 亞基，抑制肽鏈延長，干擾細(xì)菌蛋白質(zhì)合成，屬生長 期抑菌劑。鹽酸林可霉素在治療各種感染中得到廣泛應(yīng) 用，因此，建立鹽酸林可霉素快速而有效的含量檢測方法 尤為重要。目前，鹽酸林可霉素的含量測定方法有色譜法、 質(zhì)譜法、光譜法。色譜法中流動相幾乎都用到鹽溶液， 但質(zhì)譜法所用儀器昂貴，不利于產(chǎn)品質(zhì)量控制的推廣。

U3000 戴安高效液相色譜儀，配戴安二極管陣列檢測 器，美國熱電公司；XS105DU 型分析天平 （瑞士 Mettler Toledo 公司）；FE20 型 pH 計 （瑞士 Mettler Toledo 公司）； KQ-300DV 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公 司）。

甲醇、乙腈均為色譜純，美國 Merck 產(chǎn)品；氨 水、磷酸為分析純，購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑北京有限公司； 實驗用水為 milli-Q 超純水。

鹽酸林可霉素對照品（中國食品藥品檢定 研究院，批號：130432-201109，含量：85.7%）。

鹽酸林可霉素注射液供試品 A （規(guī)格 10∶ 0.6，mL/g）由標(biāo)稱安徽省某企業(yè)生產(chǎn)；鹽酸林可霉素注射 液供試品 B、鹽酸林可霉素注射液供試品 C （規(guī)格 10∶1， mL/g），由標(biāo)稱河北省某企業(yè)生產(chǎn)；鹽酸林可霉素注射液供 試品 D（規(guī)格 10∶0.6，mL/g）由標(biāo)稱山東省某企業(yè)生產(chǎn)。

色譜柱：Waters XSelect CSH C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）； 流動相：以磷酸溶液[取磷酸 13.5 mL，加水至 1 000 mL， 用氨水調(diào)節(jié) pH 值至（6.0±0.1）]-乙腈-甲醇（80∶15∶15）；流 速：1.0 mL/min；柱溫：40 ℃；二極管陣列檢測器；掃描波 長：190～400 nm；分辨率 1.2 nm；記錄 210 nm 的色譜圖； 進(jìn)樣量：10 μL。

精密稱 取鹽酸林可霉素對照品 250.25 mg，置 25 mL 量瓶中，加流動相稀釋并定容至刻度，作為對照品儲備液（含林可霉素 約 10 mg/mL）。精密量取適量，用流動相稀釋成 2 mg/mL 的系統(tǒng)適用性溶液。 2．2．2 供試品溶液制備 精密量取供試品適量 （約相當(dāng) 于林可霉素 100 mg），置 50 mL 量瓶中，用流動相稀釋并 定容至刻度，即得。

林可霉素在“2.1”色譜 條件下，取系統(tǒng)適用性溶液 10 μL，注入高效液相色譜儀， 記錄色譜圖及光譜圖。結(jié)果表明，林可霉素 B 與林可霉素 完全分離，分離度大于 2.1，林可霉素色譜峰理論塔板數(shù) 大于 7 000，表明方法專屬性良好，說明所選的試驗條件 滿足測定要求。系統(tǒng)適應(yīng)性溶液色譜圖及相應(yīng)對照品光譜。

精密量取對照品儲備液適量，用流動相稀釋 成 0.1 mg/mL、0.5 mg/mL、1.0 mg/mL、1.5 mg/mL、2.0 mg/mL、 4.0 mg /mL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，照“2.1”項下的色譜條件測 定。按峰面積與對應(yīng)的濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計算回歸方程 和相關(guān)系數(shù)。回歸方程及相關(guān)系數(shù)分別為：Y=7.240 2X2.238 3，R=0.999 9。結(jié)果表明，林可霉素在 0.1～4.0 mg/mL 濃度范圍內(nèi)，濃度與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

精 密 吸 取 對 照 品 溶 液 10 μL，在 “2.1”項下的色譜條件，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣 6 次，記錄峰面積，6 次林可霉素峰面積的 RSD 為 0.1%，表明儀器精密度良好。

3.1 檢測波長的選擇 由于林可霉素、林可霉素 B 為末端吸收，在林可霉素 的光譜圖中顯示最大吸收峰 196.5 nm，但是考慮到流動相 中甲醇、乙腈在紫外末端的影響，所以選定在較高靈敏度 的 210 作為檢測波長。本液相方法與《中華人民共和國獸 藥典》2015 年版一部的液相色譜方法進(jìn)行比較，兩者在測 定樣品中林可霉素含量時，測定結(jié)果基本一致（P>0.05）。

3.2 本方法具有減少鹽溶液對色譜系統(tǒng)的污染、提高色 譜系統(tǒng)的穩(wěn)定性、同時簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、專屬性強(qiáng)， 能夠有效的控制該產(chǎn)品的質(zhì)量，為產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)改進(jìn)提供了研究基礎(chǔ)。



 

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