人參二醇酰化產(chǎn)物的合成及其舒張血管活性評價(jià)

三七皂苷或人參皂苷是三七或人參的主要活性 成分，其主要具有抗腫瘤、免 疫 調(diào) 節(jié)、抗 炎 鎮(zhèn) 痛 等 作 用，其酸水解后水解產(chǎn)物之一為人參二醇。 本課題 組長期從事人參皂苷元類化合物的結(jié)構(gòu)修飾，已經(jīng)制備了較多的人參二醇或者人參三醇衍生物，脂 肪 酸類，氨基酸類與人參二醇或者原人參二醇結(jié)合的衍 生物中均有比人參二醇或者原人參二醇更有效的抗 腫瘤活性化合物。 本課題組前期經(jīng)還原胺化反應(yīng)將人參二醇降解產(chǎn)物的 3 位羰基轉(zhuǎn)變成氨基，再與酰 化試劑以及磺酰氯等試劑反應(yīng)，得到一系列降解人參 二醇的衍生物 17 個(gè)，采用 MTS 法對 5 株腫瘤細(xì)胞株 進(jìn)行活性評價(jià)， 找到一些有細(xì)胞毒活性的化合物。 肉桂酸（ 又名桂皮酸） ，是一種非常重要的植物源的天 然產(chǎn)物，是從肉桂皮或安息香分離出的有機(jī)酸，肉桂 酸及其衍生物具有抗老年癡呆，抗結(jié)核，抗菌， 抗氧化，抗腫瘤，抗心血管系統(tǒng)疾病等多種 生物活性。 本文通過人參二醇與酰氯或者肉桂酸（ 酰 氯） 試劑反應(yīng)合成人參二醇衍生物或者人參二醇肉桂 酸類衍生物，并且評價(jià)其舒張血管活性，期望找到一 些舒張血管活性較好的化合物。

AV-400 核磁共振儀或 AV-500 核磁共振儀 （ 德 國 Bruker 公 司 ） ；LCQ -Advantage LC -MS（ Thermo Finnigan） ；RE-2000A 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 （ 上海亞榮生化儀 器廠） ；電子天平 （ 賽多利斯） ；DF-101S 集熱式恒溫加熱磁力攪拌器（鞏義市予華儀器有限公司） ；KQ-100 型超聲清洗器（ 昆山市超聲儀器有限公司） ；SHZ-D 循環(huán)水式真空泵 （ 鞏 義市予華儀器有限公司） ；Wire Myograph System DMT 血管張力測定儀（ Danish MyoTechnology） 。 SD 大 鼠 （ 昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供） ； GF254 薄層層析板； 柱層析用硅膠 （ 青島海洋化工 廠） ；高效薄層層析板（ 默克） ；人參二醇（ 上海思達(dá)醫(yī) 藥化工科技有限公司） ；

在帶有加熱、攪拌、回流冷 凝管等裝置的 25 mL 二頸瓶中分別加入人參二醇 50 mg，二甲基丁酰氯 151.9 mg，DMAP 44 mg，吡啶 8 mL， 在常溫下攪拌 24 h。 減壓蒸干吡啶后， 加入 30mL 水后用乙酸乙酯萃取 （ 100 mL×3） ， 合并萃取 液， 用 10%鹽酸洗 3 次、 飽和食鹽水洗 3 次， 無水 Na2SO4 干燥，過濾，濾液濃縮，硅膠（ 300-400 目，石油 醚：乙酸乙酯） 柱色譜純化得化合物 1。

在帶有加熱、攪拌、回流冷凝 管 等 裝 置 的 25 mL 二頸瓶中分別加入人參二醇 50mg，肉桂酰氯 151.9 mg，DMAP，44 mg，吡啶 8 mL，在 常溫下攪拌 24 h。 減壓蒸干吡啶后，加入 30 mL 水后 用乙酸乙酯萃取（ 100 mL×3） ，合并萃取液，用 10%鹽 酸洗 3 次、飽 和食鹽水洗 3 次，無水 Na2SO4 干 燥，過 濾，濾液濃縮，硅膠（ 300-400 目，石油醚：乙酸乙酯） 柱色譜純化得化合物 2 （ 23.5 mg） 。

在二頸反應(yīng)瓶中加入 人 參二醇（ 1eq，0.05 mmol） 、肉桂酸 衍 生 物（ 3eq，0.15 mmol） 和 10 mL CH2Cl2，攪拌使其充分溶解 后，加 入 過量 DCC 和少量 DMAP，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)過夜。 過濾， 濾液用飽和食鹽水洗滌一次，加入無水 Na2SO4 干燥， 再次過濾，濾液減壓濃縮，硅膠（ 300-400 目，石油醚： 乙酸乙酯） 柱色譜純化得到化合物 3-10。

在室溫 （ 22±2）℃條件下，SD 大鼠用 10%水合氯醛（ 0.35 mL/100 g） 腹腔注射麻醉 處死后， 并迅速取出心 臟和大腦于 4 ℃ MOPS-PSS 液中。 體式解剖顯微鏡下，用顯微手術(shù)器械將腦基底 動(dòng)脈（ BA） 周圍組織分離干凈，將冠狀動(dòng)脈和腦基底 動(dòng)脈剪成約 1 mm 動(dòng)脈環(huán)，穿金屬絲備用。

體式解剖顯微鏡下， 用兩根 60 μm 的金屬絲穿過血管環(huán)， 分別掛置于 DMT 浴槽 中的方向相反的一對金屬固定器上 。 浴 槽 中 盛 MOPS-PSS 工 作 液 5 mL， 恒 溫 37 ℃并 且 持 續(xù) 通 入 95%O2 和 5%CO2 的 混 合 氣 體。 每 隔 20 min 換 1 次 MOPS-PSS 工作液， 平衡 60 min。 然后更換 MOPSKPSS 工作液（ 含 60 mM K+ ） 5 min，檢測血管環(huán)活性。 當(dāng)收縮力為預(yù)負(fù)荷 2 倍左右時(shí)認(rèn)為活性合格，可用于 實(shí)驗(yàn)。 然后按照預(yù)先計(jì)算的給藥體積加藥。

BA 平 衡并檢測血管環(huán)活性合格后， 加入 60 mM KCl 收縮 血管，待收縮達(dá)到最大值且平衡后，將事先 DMSO 配 制成濃度為 100 mM 的受試樣品 15 μL 加入到 5 mL 的營養(yǎng)液中就成為最終濃度（ 300 μM） 。 用 PowerLAB 數(shù)據(jù)記錄和分析系統(tǒng)采集數(shù)據(jù)。 每一個(gè)受試藥物取 8 根血管環(huán)進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。

采用相對張力值 （ %） 來表示，相對張力值小于 50%時(shí)，認(rèn)為有較為顯 著的血管舒張活性，相對張力值越小表示藥物對血管 的舒張活性可能越好。 相對張力值計(jì)算公式為：相對 張 力 值=（ X-平 衡 值）（/ 60 mMK+收 縮 值-平 衡 值） × 100%（ X 表示給藥后 PowerLAB 采集到的有效數(shù)值） 。 陽性對照為人參皂苷 Rg1。

由表 1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，化合物 1，3，4，7 有顯 著的舒張 BA 血管活性，其活性高于陽性對照人參皂 苷 Rg1。

本研究通過人參二醇經(jīng)酰化反應(yīng)得到 10 個(gè)酰化 產(chǎn)物， 利用 SD 大鼠腦基底動(dòng)脈建立的離體模型，將 10 個(gè)衍生物進(jìn)行了舒張 SD 大鼠腦基底動(dòng)脈活性的 初步篩選研究，發(fā)現(xiàn)化合物 1，3，4，7 的相對張力值均 小 于 50%， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 ， 初 步 表 明 化 合 物 1，3，4，7 對 SD 大鼠腦基底動(dòng)脈具有一定的舒張活 性，根據(jù)相對張力值的計(jì)算公式結(jié)合藥理實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì) 方案，初步推測認(rèn)為相對張力值越小，舒張血管活性可能越好，但需進(jìn)一步的體內(nèi)藥理活性研究。 這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果為人參二醇的結(jié)構(gòu)改造和構(gòu)效關(guān)系的探討提 供了一定依據(jù)，為進(jìn)一步尋找更加理想舒張血管活性 的人參二醇衍生物提供了思路。