地皮菜提取液研究（昆山舒美KQ-400KDE使用）

1 材料與方法 

1.1 材料與試劑 

地皮菜：山西忻州農貿市場；氯化硝基四氮唑藍 （nitroblue tetrazolium chloride，NBT）、吩 嗪 硫 酸 甲 酯 （phenazine methosulfate，PMS）、還原型輔酶 1（nicoti－ namide adenine dinucleotide，NADH）、二苯基苦基苯肼 （DPPH）、2，2-聯氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二 銨鹽（ABTS）：Sigma 公司；試劑均為分析純。 大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、LB 培 養基：忻州師范學院微生物實驗室提供。 

1.2 儀器 

紫外-可見分光光度計（UV-1800）：上海美譜達儀 器有限公司；超聲波清洗器（KQ-400KDE）：昆山舒美超聲儀器有限公司；超凈工作臺（SW-CJ-2F）：蘇州凈化 設備有限公司；全自動高壓蒸汽滅菌鍋（D-1）：上海喬 躍電子有限公司；恒溫恒濕生化培養箱（HWS-150）： 北京中興偉業儀器有限公司。 

1.3 試驗方法 

1.3.1 地皮菜活性成分的提取 

地皮菜水洗，烘干、粉碎、過篩 60 目篩。稱取5.000 g 地皮菜粉末 4 份分別置于 300 mL 錐形瓶中， 分別加入 100 mL 的蒸餾水、40 %乙醇、70 %乙醇和 無水乙醇，在 65 ℃下超聲輔助提取 30 min，超聲功率 為 320 W。冷卻離心，導出上清液，將濾渣重復提取 2 次。合并濾液，抽濾，濃縮至 200 mL，用提取劑定容至 250 mL。 

1.3.2 抗氧化能力測定

向比色管中加入0.30、0.60、0.90、1.20、1.50、1.80、2.10、 2.40、2.70、3.00 mL 的地皮菜提取液，加蒸餾水至 3.00 mL， 依 次 加 6 mmol/L FeSO4 溶 液 2.00 mL，2.4 mmol/L 的 H2O2 溶液 2.00 mL，搖勻，靜置 10 min，加入 6 mmol/L 水楊酸溶液 2.00 mL，搖勻，37 ℃水浴 30 min，離心 （3 000 r/min）10 min。取上清液于 520 nm 測吸光度 （A），以蒸餾水代替水楊酸做參比調 i 零（A）j 。以蒸餾水 代替樣品液做空白對照（A0 ），平行測定 3 次。吸取 1.00 mL 150 μmol/LNBT，1.00 mL 60 μmol/L PMS 于比色管中，分別加入 0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、 1.20、1.40、1.60、1.80、2.00 mL 樣品液，補加蒸餾水 至 4.00 mL，混勻，加入 1.00 mL 468 μmol/L NADH（由 16 mmol/L Tris-HCl 在 pH 8 時配制而成）。于 560 nm處 測定樣品吸光度（A），以蒸餾水代替 i PMS 溶液做參比 參比調零（A）j 。以蒸餾水代替樣品液做樣品空白對照 （A0 ），平行測定 3 次。將 5.00 mL 7 mmol/L 的 ABTS 和 88 μL 140 mmol/L 的過硫酸鉀混合，在 25 ℃、避光的條件下靜置過夜，形 成 ABTS+ ·儲備液，使用前用無水乙醇稀釋成工作液。 在 734 nm 波長下的吸光度為 0.7±0.02。吸取 0.04、 0.08、0.12、0.16、0.20、0.24、0.28、0.32、0.36、0.40 mL 地 皮菜提取液于比色管中，加蒸餾水至 0.40 mL。加入 2.00 mL ABTS·+ ，振蕩 30 s，25 ℃下靜置 6 min。在 734 nm 波長處測定地皮菜提取液樣品的吸光度值 （A），以 i 80 %乙醇溶液代替 ABTS+ ·溶液做參比調零（A）j 。以蒸 餾水代替樣品液做樣品空白對照（A0 ），平行測定 3 次。

2 結果與分析

OH 是目前所知活性氧中對生物體毒性最強，危 害最大的一種自由基，可與生物體內多種分子作用， 造成糖類、氨基酸、蛋白質、核酸等物質氧化損傷，使細 胞壞死或突變。因此·OH 清除率是反映藥物抗氧 化作用的重要指標。地皮菜提取液清除羥基自由基能 力見圖 1。

4 種地皮菜提取液都具有不同程度 的清除 DPPH·能力，且清除能力與提取液用量呈正相 關。當提取液用量較小時，4 種提取液清除能力接近。 但隨著提取液用量的增加，水提取液和 40 %乙醇提取 液清除 DPPH·能力顯著增加，明顯優于 70 %乙醇和 無水乙醇提取液。當提取液用量為 3.00 mL 時，水提取 液、40 %乙醇提取液、70 %乙醇提取液和無水乙醇提 取液對 DPPH·的清除率分別為：96.73 %、87.52 %、 72.07 %、52.23 %。

3 結論 

地皮菜不同提取液均具有明顯的清除羥基自由 基、超氧陰離子自由基、DPPH·和 ABTS+ ·作用和還原 能力。其清除作用和還原能力與提取液用量呈正相 關。地皮菜水提取液清除 4 種自由基作用和還原能力 最強，無水乙醇提取液的清除作用和還原能力最弱。 抑菌作用分析表明地皮菜水提液對金黃色葡萄球菌、 枯草芽孢桿菌的具有良好的抑制作用，而無水乙醇提 取液對大腸桿菌的抑制作用最強。

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