測(cè)多評(píng)法評(píng)價(jià)清腸通腹顆粒的質(zhì)量(KQ-250D使用)

清腸通腹顆粒由大黃、黨參、桃仁、白術(shù)、木 香、厚樸、炒枳殼、赤芍、火麻仁 9 味中藥組成， 具有健脾益氣、行氣通腑、活血止痛之功效。臨床 用于治療腹部手術(shù)后引起的正氣損傷、脾失健運(yùn)、 胃納失職、氣滯血瘀、腑氣不通等癥效果顯著。清 腸通腹顆粒由 9 味中藥提取而成，其療效是多組分 共同作用的結(jié)果，單一成分的含量測(cè)定無(wú)法全面、 真實(shí)地評(píng)價(jià)其整體質(zhì)量。王智民等率先提出一測(cè) 多評(píng)法（QAMS），即利用中藥及復(fù)方制劑中的一種成 分的標(biāo)準(zhǔn)品作為內(nèi)參物，建立該成分與其他成分之 間的相對(duì)校正因子，通過(guò)相對(duì)校正因子計(jì)算其他成 分含量，來(lái)實(shí)現(xiàn)多個(gè)成分的同步測(cè)定，具有快速、 簡(jiǎn)便、成本低等優(yōu)點(diǎn)，近年來(lái)在中藥復(fù)方制劑質(zhì)量 評(píng)價(jià)中逐漸得以推廣應(yīng)用 。

1 儀器與材料 

1.1 儀器 

Shimadzu LC-2010AHT 高效液相色譜系統(tǒng) （日本島津公司），Agilent 1220 液相色譜儀系統(tǒng)（美 國(guó)安捷倫公司）；色譜柱：Agilent HC-C18（4.6 mm × 250 mm，5 μm），UItisiIAQ-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；BS210S 萬(wàn)分之一分析天平（德國(guó) Sartorious 公 司）；昆山舒美KQ-250DA 型數(shù)控超聲儀（昆山市超聲儀器有限 公司）；R206B 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海申生技術(shù)有限公 司）。

 1.2 材料

 10 批清腸通腹顆粒，參考方法制備 （批 號(hào) ： 20180401~20180410， 每 袋 5 g）； 大 黃 素 （中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào) 110756-200110， 純度≥98%）；和厚樸酚、厚樸酚、柚皮苷（寶雞市辰 光 生 物 科 技 有 限 公 司 ， 批 號(hào) ： HH041230198、 HM041231198、HN206558198，純度≥98%）；氧化芍 藥苷、芍藥苷（上海金穗生物科技有限公司，批號(hào)： 20141015，20140722，純度≥98%）；甲醇、乙腈為色 譜純，磷酸為分析純。

2 方法與結(jié)果

 2.1 定量測(cè)定分析方法學(xué)驗(yàn)證 

2.1.1 色譜條件 

色譜柱為 Agilent HC-C18和 UltisilAQC18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈-0.1% 磷酸水溶液，梯度洗脫（0~15 min，15% 乙腈；15~ 40 min，15%~38% 乙腈；40~50 min，38%~55% 乙 腈；50~65 min，55%~70% 乙腈）；體積流量：1.0 mL·min-1 ；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣 量：10 μL。標(biāo)準(zhǔn)品及供試品 HPLC 圖譜見圖 1，結(jié) 果顯示各化合物之間分離度良好。 

2.1.2 混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

 分別精密稱取氧化芍 藥苷、芍藥苷、柚皮苷、和厚樸酚、大黃素、厚 樸酚標(biāo)準(zhǔn)品適量，分別置于 10 mL 容量瓶中，加 甲醇定容至刻度，搖勻，得到單一標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液， 其質(zhì)量濃度分別為：氧化芍藥苷 0.58 mg·mL-1 、芍藥 苷 0.53 mg·mL-1 、柚皮苷 0.53 mg·mL-1 、和厚樸酚 0.86 mg ·mL-1 、大黃素 0.41 mg ·mL-1 、厚樸酚 0.75 mg·mL-1 。 精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液混合，加甲醇定容，配制 成含氧化芍藥苷 69.6 μg·mL-1 、芍藥苷 74.2 μg·mL-1 、柚 皮苷 58.3 μg·mL-1 、和厚樸酚 60.2 μg·mL-1 、大黃素 61.5 μg·mL-1 、厚樸酚 60 μg·mL-1 的混合標(biāo)準(zhǔn)品母 液，再精密吸取 1、2、3、5、8 mL 至 10 mL 容量瓶 中，加甲醇混合，定容，搖勻，制成一系列質(zhì)量濃 度的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，4 ℃冰箱保存。 

2.1.3 供試品溶液的制備

 精密稱取清腸通腹顆粒 0.5 g，置于 10 mL 容量瓶中，加入甲醇至刻度，常 溫超聲溶解 30 min；加甲醇補(bǔ)足至刻度，搖勻，濾 過(guò)，取續(xù)濾液過(guò) 0.45 μm 微孔濾膜，即得。 

2.1.4 陰性溶液的制備

 按處方稱取相應(yīng)輔料，按工 藝制備成陰性樣品，按 2.1.3 項(xiàng)下方法制備成陰性溶 液。各陰性對(duì)照組 HPLC 圖譜見圖 1，結(jié)果陰性對(duì)照 分別在氧化芍藥苷、芍藥苷、柚皮苷、和厚樸酚、 大黃素、厚樸酚相應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)干擾。 

2.1.5 線性關(guān)系的考察 

分別精密吸取一系列混合標(biāo) 準(zhǔn)品溶液各 10 μL 進(jìn)樣，按 2.1.1 項(xiàng)下的色譜條件進(jìn) 行測(cè)定。記錄相應(yīng)的色譜峰面積，以各成分峰面積為縱坐標(biāo)（Y），對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），進(jìn)行 線性回歸，回歸方程見表 1。結(jié)果顯示，各成分標(biāo)準(zhǔn) 曲線在線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.6 精密度試驗(yàn) 

取 20180401 批清腸通腹顆粒， 按 2.1.3 項(xiàng)下的方法進(jìn)行供試品溶液制備，按 2.1.1 項(xiàng)下的色譜條件，同 1 d 內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣 6 次，記錄峰面 積。結(jié)果，氧化芍藥苷、芍藥苷、柚皮苷、和厚樸 酚、大黃素及厚樸酚的日內(nèi)精密度分別為 2.82%、 0.15%、4.12%、3.24% 、4.05% 及 4.07%。以芍藥苷 為參照峰，共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和峰面積比值基本 一致，其 RSD 均小于 5.0%，相似度均在 0.95 以上， 符合指紋圖譜的技術(shù)要求，表明儀器精密度良好。

 2.1.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 

取批號(hào)為 20180401 的清腸通腹顆粒，制備供試品溶液，分別于制備后 0、2、4、8、 12、24 h 進(jìn)樣檢測(cè)，記錄色譜峰面積。結(jié)果氧化芍 藥苷、芍藥苷、柚皮苷、和厚樸酚、大黃素、厚樸 酚 的 峰 面 積 RSD 分 別 為 0.99%、 1.19%、 0.74%、 2.42%、1.51%、2.29%。以芍藥苷的保留時(shí)間和峰面 積為參照，各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和峰面積比值 基本一致，其 RSD 均小于 3.0%，相似度均在 0.95 以上，符合指紋圖譜的技術(shù)要求，表明供試液在 24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

3 討論 

清腸通腹顆粒由大黃、芍藥等 9 味藥材組成，其 中大黃具有清熱瀉火、涼血解毒、逐瘀通經(jīng)、利濕 退黃之功效，為方中君藥；芍藥具有養(yǎng)血斂陰、平 抑肝陽(yáng)、柔肝止痛的功效，炒枳殼具有理氣寬中、 行滯消脹的功效，厚樸具有健胃消食、下氣寬中、燥濕消痰的作用 ，共為臣藥。因此，選用這 4 味中 藥進(jìn)行含量測(cè)定。

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