射干飲片異黃酮苷轉化的影響(昆山舒美KQ250DB使用

腸道菌群在糖苷類化合物的代謝過程中起著 重要作用，目前植物中多數多酚類化合物以苷類的 形態存在，口服后經過水解被吸收，這個過程發 生在大腸或者小腸，研究資料表明在結腸的菌群具 有強大的催化和水解潛力，它們能夠催化黃酮類化 合物的骨架 C6-C3-C6 斷裂為各種酚酸類代謝產 物，大多數糖苷類化合物需經腸道菌群酶解為苷 元等代謝產物而發揮藥效。

1 實驗儀器與材料

Agilent 1100 LC-DAD 系統（包括在線脫氣機、 低壓四元梯度泵、自動進樣器、柱溫箱、二極管陣列 檢測器和色譜工作站）；FA1004 萬分之一天平（上 海精密科學儀器有限公司）；JSP-500A 型高速多功 能粉碎機（浙江省永康市金穗機械制造廠）；昆山舒美KQ250DB 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。三氣培養箱（德國 BINDER；CB150）。 射 干 苷（批 號 為 111632-200501，購 于 中 國 食 品藥品檢定研究院）；野鳶尾苷和野鳶尾黃素（批號分別為13030803、13051402，均購于成都普瑞法科 技有限公司）；鳶尾黃素（批號為12081808，購于成都 生物科技有限公司）。射干藥材采于湖北GAP基地， 經遼寧中醫藥大學李峰教授鑒定為射干Belamcanda chinensis（L.）DC.的根及根莖。乙腈為色譜純；水為 娃哈哈純凈水；乙醇、磷酸等其他試劑均為分析純。 K2HPO4·3H2O，KH2PO4，NaCl，（NH4）2SO4， MgSO4·7H2O，CaCl2，Na2CO3，L- 半胱氨酸，L- 抗壞 血酸，牛肉膏，蛋白胨，營養瓊脂等均購于國藥集團 化學試劑集團公司。 大鼠，雄性，體質量 180~220 g，由遼寧長生生 物技術有限公司提供，動物許可證號 SCXK（遼） 2010-0001。

2 方法與結果

2.1 厭氧培養液的制備

溶液 A：稱取 K2HPO4·3H2O 1.02 g 加水適量使 溶解并稀釋至 100 mL，備用。溶液 B：稱取 KH2PO4 0.47 g，NaCl 1.18 g，（NH4）2SO4 1.21 g，MgSO4·7H2O 0.51 g，CaCl2 0.12 g，加水適量使溶解并稀釋至 100 mL，備用。溶液 C：稱取 Na2CO3 12 g 加水適量使溶 解并稀釋至 150 mL，備用。分別取 A 液 37.5 mL、B 液 37.5 mL、C 液 50 mL 混合，加入 L- 半胱氨酸 0.5 g， 25% L- 抗壞血酸 2 mL，牛肉膏 1 g，蛋白胨 1 g，營養 瓊脂 1 g，加蒸餾水至 1 L，鹽酸調 pH 至 7.5~8.0，即 可。

2.2 大鼠腸道菌培養液的制備

按 1 g∶4 mL 的質量體積比將大鼠新鮮糞便 與生理鹽水混合研磨制成懸濁液，低溫離心 15 min （5000 r·min-1）后得上清液，即為腸道菌液。取 50 mL 腸道菌液，加入 500 mL 培養液中，混勻，得到 培養液，將厭氧培養液置于三氣培養箱中 37 ℃厭氧 條件下（NO2∶CO2∶O2=78∶20∶2）培養 24 h，得到 培養液（1）；另取 200 mL 培養液在 0.08 MPa、115 ℃ 條件下滅菌 20 min，得到空白培養液（2）。

2.3 大鼠腸道菌對射干飲片中射干苷、野鳶尾苷代謝轉化作用

取射干飲片 50 g，平行 3 份，每份分別加入 100 mL 大鼠腸道菌培養液（1），混合后在三氣培養 箱厭氧條件下（NO2∶CO2∶O2=78∶20∶2）37 ℃培養 24 h，取出，用水洗滌飲片，80 ℃干燥至干，粉碎，備 用。

2.4 HPLC方法的建立

2.4.1 色譜條件

色譜柱為 Column XB-C18（4.6 mm × 250 mm， 5 μm）；流動相為 0.2% 磷酸水溶液（A）和乙腈（B）， 梯度洗脫：0~15 min，A 為 85%~75%；15~25 min，A 為75%~72%；25~35 min，A為72%~65%；35~50 min， A 為 65%~50%。體積流量為 1.0 mL·min-1；DAD 檢 測器，檢測波長為 265 nm；柱溫 30 ℃。

2.4.2 專屬性實驗

在“2.4.1”色譜條件下，測定空白培養液（A）， 空白培養液 + 混合對照品（B）、射干飲片（C）和射干 飲片孵育 24 h（D）的色譜圖，見圖 1。結果表明：在 此色譜條件下，樣品溶液中射干苷、野鳶尾苷、鳶尾 黃素及野鳶尾黃素色譜峰可完全分離，培養液中其 他組分無干擾，專屬性良好。

2.4.3 線性關系考察

精密稱取射干苷、野鳶尾苷、鳶尾黃素、野鳶尾 黃素對照品各適量，加 70% 乙醇溶解，分別制成各 對照品儲備溶液。再分別精密吸取各對照品儲備溶 液適量至量瓶中，用 70% 依次稀釋成不同質量濃度 梯度的工作溶液，工作液中各成分的濃度見表 1。

3 討論

射干主要含射干苷、野鳶尾苷、鳶尾黃素、野鳶 尾黃素、次野鳶尾黃素、白射干素等異黃酮類化合 物，具有抗炎、抑菌、抗病毒等多種藥理效應，但由于 射干苷、野鳶尾苷等苷類成分的分子量較大，脂溶性 較差，因此在體內的吸收不好，生物利用度較低，有 德國學者研究報道，大鼠在口服射干苷溶液后，在 其尿液樣品中只檢出鳶尾黃素而并未發現射干苷。 說明在體內射干苷是通過脫掉糖基轉化成相應的苷 元鳶尾黃素而參與體內生物活動。在前期腸吸收研 究中，也發現射干苷及野鳶尾苷在大鼠腸道內會水 解為鳶尾黃素及野鳶尾黃素，并且腸道LPH 酶可 能參與了射干苷及野鳶尾苷在腸道的水解過程。



 

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