兒茶素類物質(zhì)的提取及含量測定-KQ-250E使用

茶葉是人們?nèi)粘Ｏ矚g的飲品之一，茶葉中含有多種 天然活性物質(zhì)。茶多酚是茶葉中的主要有效成分，占干 質(zhì)量的 15% ～ 30%，兒茶素類占其中的 60% ～ 80%。 主要包括表兒茶素( epicatechin，EC) 、表沒食子兒茶素 ( epigallocatechin，EGC) 、表兒茶素沒食子酸酯( epicatechin gallate，ECG) 、表沒食子兒茶素沒食子酸酯( epigallocatechin gallate，EGCG) 。

1 材料與方法

1. 1 儀器與試劑

1. 1. 1 儀器

高效液相色譜儀( Alliance 2695 /2498，美國 Waters 公司) ; 色譜柱( AcclaimTM 120，美國 Thermo scientific 公司) ; BT25S 電子分析天平( 北京賽多利斯儀器 有限公司) ; KQ-250E 型超聲波清洗儀( 昆山舒美超聲儀器有限公司) ; ＲCTBS025 控溫磁力攪拌器( 德國 IKA 公司) ; 高速離心機(jī)( 日本久保田 2420) ; UV2550 紫外 可見分光光度計( 日本島津公司) 。

1. 1. 2 試劑

標(biāo)準(zhǔn)對照品 CAF 購自美國 Alfa Chemical 公司 ; EGCG、ECG、EC 購自大連美侖生物技術(shù)有限公司。 甲醇( 色譜純，購自美國 Fisher 公司) ，水為雙蒸水。 無水乙醇( 分析純) 購自北京現(xiàn)代東方精細(xì)化學(xué)品 有限公司; 36% 乙酸( 分析純) 購自國藥集團(tuán)化學(xué)試 劑有限公司。實驗所用茶葉均為北京市商品市售 茶葉。

1. 2 溶液的配制

1. 2. 1 對照品儲備溶液

分別精密稱取 CAF 50 mg、EGCG 75 mg、ECG 50 mg、EC 15 mg 標(biāo)準(zhǔn)對照品，置于 50 mL 容量瓶，加適 量無水乙醇溶解后，稀釋至刻度，搖勻后配制成 CAF 質(zhì)量濃度為 1 mg /mL、EGCG 質(zhì)量濃度為 1. 5 mg /mL、 ECG 質(zhì)量濃度為 1 mg /mL、EC 質(zhì)量濃度為 300 μg / mL 的儲備液。

1. 2. 2 茶葉樣品溶液

茶葉樣品用研缽搗碎，準(zhǔn)確稱取茶葉樣品加入到 錐形瓶中，采用不同濃度的提取溶劑乙醇，控制不同 的提取時間，不同料液比，分別進(jìn)行加熱和超聲波輔 助浸提法工藝進(jìn)行提取。把提取所得的茶葉溶液用 離心機(jī)以 4 000 r /min 離心 10 min，取上清液經(jīng) 0. 45 μm 的微孔濾膜過濾，取濾液 200 μL，加入流動相 800 μL，作為樣品溶液進(jìn)行 HPLC 測定。

1. 3 檢測波長的選擇

取標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液，在 200 !400 nm 波長范圍內(nèi) 進(jìn)行掃描，詳見圖 1。實驗選擇 280 nm 為檢測波長， 此波長下 CAF、EGCG、ECG、EC 均有較強(qiáng)的紫外吸 收，并且基線平穩(wěn)，信噪比高。

1. 4 色譜條件

色譜柱為 C18( 5 μm × 4. 6 mm × 250 mm) ; 流動 相為甲醇∶ 雙蒸水∶ 36% 乙酸( 25 mL∶ 74 mL∶ 1 mL) ; 流速為 1 mL /min; 檢測波長為 280 nm，柱溫為室溫; 進(jìn)樣體積為 10 μL。

2 結(jié)果

加熱浸提法是傳統(tǒng)的提取工藝，提取條件簡單易 行，為防止一些物質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，提取溫度不宜太高。由于 CAF、EGCG、ECG 和 EC 都能溶于乙醇中，實驗以 乙醇溶液為提取溶劑，采用市售綠茶為樣本，把所得提取 液按照“1. 2. 2”以及“1. 4”項下色譜條件進(jìn)行處理和測 定，通過單因素實驗來考查乙醇的濃度、浸提時間、料液 比不同對 CAF、EGCG、ECG、EC 提取率的影響。超聲波提取是利用超聲波機(jī)械粉碎和空化作用， 加速提取物從茶葉向溶劑擴(kuò)散的速度，增加有效成分 的提取率，可避免加熱造成如兒茶素類物質(zhì)的氧化。 實驗以乙醇為提取溶劑，采用市售綠茶為樣本，在室溫 條件下，以超聲功率為 250 W 進(jìn)行提取。把所得提取 液按照“1. 2. 2”以及“1. 4”項下色譜條件進(jìn)行處理和測 定，通過單因素實驗考查乙醇的體積分?jǐn)?shù)、超聲時間、 料液比不同對 CAF、EGCG、ECG、EC 提取率的影響。

3 討論

茶葉中含有多種有效成分，本實驗是研究不同提 取工藝，同時復(fù)合提取 CAF、EGCG、ECG、EC 這 4 種 有效成分。從加熱和超聲提取工藝來看，較高的浸出 率是乙醇提取濃度在 50% !75% 范圍內(nèi)。推斷是因為 幾種物質(zhì)在乙醇和水中都有一定的溶解度，但由于它 們結(jié)構(gòu)中含有親水和疏水基團(tuán)，所以純粹用水或用乙 醇做提取溶劑都不能達(dá)到它們最大的浸出度，而一定比例的醇、水混合是最合適的提取劑，所以實驗選定 了 65% 的乙醇為提取濃度。