分析丹參水提取物成分的定性

丹參為唇形科植物丹參 Salvia miltiorrhize Bge. 的干燥根和根莖，始載于《神農本草經》，具 有活血祛瘀、通經止痛和清心除煩的功效。丹參 的有效成分有水溶性和脂溶性 2 大類，本實驗中的 丹參水提取物為水溶性成分，以丹酚酸 B （salvianolic acid B）和紫草酸（lithospermic acid） 等酚酸類物質為主要成分。目前，丹參水提取物中 的含量較高的主要成分研究已經很多，本實驗基 于四極桿-飛行時間質譜技術（Q-TOF-MS）進一步 分析了丹參水提取物中的化學成分；并對部分用 常規手段難以檢測的低含量成分，基于四極桿-線性 離子阱質譜（Q-Trap-MS）技術與方法進行了 半定量研究。半定量的方法目前研究尚少，但 對沒有對照品的物質來說卻極為重要。

AcquityTM UPLC 超高效液相色譜系統、Synapt G2 Q-TOF-MS 質譜系統、MassLynx V4.1 質譜工作 站、Acquity UPLC HSS T3 色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm），美國 Waters 公司；AB SCIEX Q-Trap 5500液質聯用系統，島津UFLC超高效液相系統（配 備 DGU-20A5R 脫氣機，SIL-30AC 自動進樣器， CTO-30A 柱溫箱，LC-30AD 液相泵）；KQ-500DE 型數控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；XS105 型十萬分之一天平，梅特勒-托利多儀器有限 公司。水為超純水，Milli-Q 型超純水系統，德國 Millipore 公司；甲醇、乙腈，質譜純，德國 Merck 公司；甲酸，質譜純，美國 Sigma 公司；其余試劑 均為分析純。 對照品丹酚酸 B（批號 111562-201716，質量分 數 94.1%），購自中國食品藥品檢定研究院；紫草酸 （批號 FY18351203，質量分數 96.3%），購自南京飛 宇生物科技有限公司。5 批丹參水提取物批號分別 為 20100201、20110503、20111205、20111206、 2014A02，均由天津天士力之驕藥業有限公司提供， 該提取物由水煮沸提取而得。

稱取丹酚酸 B 對照品 0.91 mg 和紫草酸對照品 0.99 mg，分置 100 mL 量瓶中，加純水溶解，定容 至刻度。再分別稀釋 2、10、50、100、200、500 和 1 000 倍，備用。

稱取 5 批丹參水提取物各約 1 mg，分置 2 mL 量瓶中，加純水溶解，定容至刻度，備用。

色譜柱為 Waters Acquity UPLC HSS T3 柱（100 mm×2.1 mm， 1.8 μm），柱溫 30 ℃，樣品室溫度 4 ℃。流動相為 乙腈-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫，0～3 min，10%～ 19%乙腈；3～10 min，19%～23%乙腈；10～12 min， 23%～30%乙腈；12～14 min，30%～50%乙腈；14～ 20 min，50%～90%乙腈；20～21 min，90%～10% 乙腈；21～22 min，10%乙腈；進樣量 5 μL，體積 流量 0.3 mL/min。

色譜柱為 Waters Acquity UPLC HSS T3 柱（100 mm×2.1 mm， 1.8 μm），柱溫 40 ℃。流動相為乙腈-0.1%甲酸水溶 液，梯度洗脫：0.5～12 min，10%～35%乙腈；12～ 15 min，35%～70%乙腈；15～17 min，70%～100% 乙腈；17～18.4 min，100%乙腈；18.4～19 min， 100%～10%乙腈；進樣量 3 μL，體積流量 0.3 mL/min。另外，在檢測未知成分時，將色譜柱流出 液在 0～6 min 進廢液，6～8.4 min 進質譜，8.4～10.6 min 進廢液，10.6～15 min 進質譜，15～19 min 進 廢液。檢測紫草酸和丹酚酸 B 對照品時，0～19 min 進質譜。

采用電噴 霧離子源（ESI），負離子模式，毛細管電壓 2.5 kV， 錐孔電壓 40 V，提取錐孔電壓 5 V，離子源溫度 110 ℃，脫溶劑氣體（N2）溫度為 350 ℃，脫溶劑氣體 流量 800 L/h，錐孔氣流量 50 L/h，采集頻率 0.2 s。 用亮氨酸腦啡肽作為內標（Lock SprayTM）進行質 量實時校正，體積流量為 5 μL/min。同樣質譜條件 下的 3 種質譜檢測模式分別為（1）MSE Continuum 掃描模式檢測，掃描時碰撞能量為 20～30 eV，質 量掃描范圍 m/z 100～1 500。（2）MS/MS 模式下檢 測，碰撞室 Trap CE Control 使用線性能量掃描 20～ 30 eV，且碰撞室 Transfer CE Control 關閉。

離子源為 電噴霧離子源（負離子模式）；離子噴射電壓：−4 500 V；溫度：450 ℃；源內氣體 1（GS1，N2）壓力：310 kPa；源內氣體 2（GS2，N2）壓力：310 kPa； 氣簾氣體（N2）壓力：138 kPa；應用 MRM 模式進 行半定量分析，待測物質譜參數見表 1，表中參數 的選擇依據按照“2.6.1”項和“2.6.2”項下說明。 

丹參水提取物中多為水溶性成分，且絕大部分 為酚酸類物質，在選用色譜柱的時候，因考慮到樣 品的特殊性，并參考其他的文獻，最后選用 Acquity UPLC HSS T3 柱，展現了良好的分離效果。另外，因大部分成分含有羧基，易脫 1 個氫離子，形成 [M－ H]− ，所以在用 Q-TOF-MS 進行分析的時候，選用 負離子模式。

在對丹參水提取物中的成分進行定性研究時， 并未使用對照品，而是通過查閱文獻和數據庫的方 式進行定性。先建立已報導的丹參的質譜譜庫（包 含母離子、子離子和保留時間），再比對質譜圖中各成分的碎片離子和保留時間，從而確定物質的結構。 一定程度上節省了資源，也加快了定性分析的時間， 更加方便后期對丹參更深入的研究。

丹參水提取物中包括同分異構體共 11 種未知 成分的含量較低而丹酚酸B 和紫草酸等成分含量特 別高，使檢測器達到飽和，遂使保留時間在 8.4～ 10.6 min 的成分（丹酚酸 B、紫草酸等）經色譜后直接進入廢液，而不進入質譜檢測器。這樣，提高 11 種待測物質量濃度的同時，也不會有過多的酚酸 類的物質進入質譜，產生殘留或影響檢測器靈敏度。



 

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