護肝片中牡荊苷和異牡荊苷的含量分析

護肝片具有抑制肝纖維化、保肝、降酶等作用，是目前國內治療肝損傷、早期肝癌及化療藥物性肝損傷的常用中成藥。目前護肝片的質 量標準中僅以五味子醇甲作為指標對成方質量進行評價，可能無法準確評價護肝片質量或消除為達到質 量要求而僅添加單一成分的情況。

METTLER AE240（十萬分之一）、SARTFORUIS AG BS（萬分之一）電子分析天平（施耐德），HW.SY21-K 型電熱恒溫水浴鍋（北京市長風儀器儀表公司），KQ400KDE 型高功率數控超聲波清洗器（昆山舒美）。 　　Waters 1525 高效液相色譜儀（美國 Waters 公司，包 括 Breeze2 HPLC 色譜工作站，Waters 2414 示差折光檢 測器，Waters 2707 自動進樣器，Waters 038040 柱溫箱）。

乙腈（HPLC 級，Fisher 公司），水為純凈水（杭州 娃哈哈集團有限公司），其他試劑均為分析純（北京化 工廠）；牡荊苷（批號：Y25A8H42502）、異牡荊苷（批 號：Y07J8H39516）對照品（上海源葉生物科技有限公 司，純度均大于 98%）。護肝片（糖衣片，片心重 0.35 g）為市售樣品，共收集了 16 個不同廠家 30 批樣品， S1-1 ～ S1-15 來自同一廠家，S2 ～ S16 分別來自其他 不同廠家。

色譜柱：Prevail C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）； 流動相：乙腈 - 水（20∶80）；柱溫：30℃；檢測波長： 337 nm，流速：1 mL·min － 1 ；進樣體積：15 μL。理 論塔板數按牡荊苷和異牡荊苷計不低于 3000。對照品和樣品色譜圖見圖 1。

分別精密稱取牡荊苷和異牡荊苷對照品適量，置 10 mL 量瓶中，用70% 甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻， 即得單個對照品儲備液（牡荊苷和異牡荊苷質量濃度 分別為 0.496 mg·mL－ 1 和 0.552 mg·mL－ 1 ）。 再 分 別精密吸取牡荊苷和異牡荊苷對照品儲備液各 2 mL 置 10 mL 量瓶中，加 70% 甲醇溶解并稀釋至刻度，搖 勻，即得混合對照品儲備溶液（牡荊苷 99.2 μg·mL－ 1 ，異牡荊苷 110.4 μg·mL－ 1 ）。

2.3　供試品溶液的制備 　　

先取同一批護肝片 10 片，除去包衣，研成細粉； 再取護肝片粉末約 1.4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶 中，精密加入 70% 甲醇 25 mL，密塞，稱重，置水浴 加熱回流 90 min，放冷，再稱定重量，用 70% 甲醇補 足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

根據文獻報道，牡荊苷和異牡荊苷是綠豆中兩種 含量較高的黃酮類成分，具有較好的抗氧化、抗肝毒、 抗菌、抗炎及心血管保護作用，是綠豆中的主要活性 成分。因此，本研究選擇牡荊苷和異牡荊苷作為測定 指標對護肝片進行含量測定。將牡荊苷和異牡荊苷對照品溶液分別進行全波長 掃描，兩者均在 337 nm 下有最大吸收，故選 337 nm 為牡荊苷和異牡荊苷含量的測定波長。因黃酮類成分 在甲醇中溶解度較好，故選擇甲醇作為提取溶劑，對 比不同濃度的甲醇提取結果，最終選擇 70% 甲醇作為 最佳提取溶劑。此外，通過優化回流時間并與超聲提 取結果進行比較，最終確定 70% 甲醇回流 90 min 為提 取方法。在所確定的色譜條件下，對照品及樣品的色譜圖 中在保留時間約 3.8 min 處均出現一色譜峰，空白溶劑 也在此處出峰，故確定此峰為溶劑峰。



 

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