前胡類藥材HPLC特征圖譜研討

前 胡，首 載 于《名 醫 別 錄》，列 為 中 品 ，來 源于傘形科前胡屬植物白花前胡 Peucedanum praeruptorum Dunn 的干燥根，具有降氣化痰及散風清 熱的功效，用于痰熱喘滿，咳痰黃稠，風熱咳嗽痰多等 癥的治療 ，主產于甘肅、河南、貴州等地 ?，F代 研究發現，前胡的化學成分主要包括香豆素、菲醌、有 機酸、甾醇及揮發油等類化合物 ，具有止咳、平喘 等藥理活性。

Waters 2695 高效液相色譜儀（包括四元泵、PDA 檢 測 器、自 動 進 樣 器 及 Empower 工作站；Waters 公 司），Mettler MS105DU 電 子 天 平（Mettle-Toledo 公 司），KQ-300DA型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。Umetrics Ezinfo 數據處理軟件 （Waters 公司）。 甲醇為色譜級，水為 Milli-Q 超純水，其他試劑 均為分析純。對照品白花前胡甲素（批號 111711- 200602，含 量 以 100% 計）、白 花 前 胡 乙 素（批 號 111904-201203，含量以 98.0% 計）、紫花前胡苷（批 號 111821-201604，含 量 以 99.6% 計）均 來 自 中 國 食品藥品檢定研究院；白花前胡 E 素（批號 DFZY20180112，含量以 99.9% 計）購自成都瑞芬思生物技 術有限公司。采集時間為 2017 年 8 月—12 月，并經中國食品藥品檢定研究院程顯 隆研究員鑒定。

采用Aglient TC-C18（2）色 譜 柱（4.5 mm×250 mm，5 μm），以水（A）- 甲醇（B）為流動相，梯度洗脫 （0~15 min，40%B；15~16 min，40%B → 48%B；16~26 min，48%B → 75%B；26~55 min，75%B → 95%B； 55~56 min，95%B → 99%B；56~60 min，99%B），流速 1.0 mL·min-1，檢測波長 325 nm，柱溫 30 ℃，進樣量 5 μL；理論塔板數以白花前胡甲素峰計算應不得小于 4 000。

取紫花前胡苷、白花前胡甲素、白花前胡乙素、 白花前胡 E 素的對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解 制成上述 4 個成分分別含 0.509 9、0.465 5、0.501 2、0.504 9 mg·mL-1 的混合對照品儲備液。精密量取混 合對照品儲備液 1.0 mL，置于 10 mL 量瓶中，加甲醇 稀釋至刻度線，搖勻，即得。

取樣品粉碎，過 4 號篩，取粉末約 0.25 g，精密稱 定，置 100 mL 錐形瓶中，精密加入甲醇 25 mL，稱定 質量，超聲處理（功率 240 W，頻率 45 kHz）20 min， 放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的量，搖勻，過 0.22 μm 微孔濾膜，取續濾液，即得。

分 別 取 QH-01、ZHQH-01 及 YQH-01 號藥材粉末約 0.25 g，精 密 稱 定，分 別 按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分別連續進樣 6 次，記錄色譜圖，考察儀 器的精密度。結果表明，各主要色譜峰保留時間的 RSD 均小于 0.5%；各主要色譜峰峰面積的 RSD 均 小于 3.0%，采用 Chempattern 化學計量學軟件進行 數據處理，相似度均大于 0.95，表明儀器的精密度 良好。

分 別 取 QH-01、ZHQH-01 及 YQH-01 號藥材粉末 6 份，精密稱定，按“2.3”項下 方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分別 進樣分析，記錄色譜圖，考察方法的重復性。結果表 明，6 份樣品中各主要色譜峰保留時間的 RSD 均小 于 0.5%，各色譜峰峰面積的 RSD 均小于 1.5%，采用 Chempattern 化學計量學軟件進行數據處理，相似度 均大于 0.95，表明重復性良好。

取精密度試驗項下供試品溶液， 按“2.1”項下色譜條件，分別在 0、4、8、12、18 h 進行 測定，考察供試品溶液的穩定性。結果表明，各主要 色譜峰保留時間的 RSD 均小于 0.6%，各色譜峰峰面 積的 RSD 均小于 3.0%，采用 Chempattern 化學計量 學軟件進行數據處理，相似度均大于 0.95，表明供試 品溶液的穩定性良好。

本實驗考察了不同提取溶劑（甲醇、三氯甲烷、 50% 乙醇）、不同的提取方法（超聲、回流）及不同的 提取時間（10、20、30 min）等因素對提取效率的影 響，最終比較測定結果并結合環保的考慮，確定以甲 醇為提取溶劑，超聲提取 20 min，提取效率最高，方法 操作簡單，結果可靠。采用二極管陣列檢測器進行掃描，考察不同吸收 波長處的圖譜響應強度，紫花前胡苷、白花前胡甲素、 白花前胡乙素及白花前胡 E 素分別在 335.7、322.5、 320.1 及 322.5 nm 處有最大吸收，本研究側 重于前胡藥材中的主要香豆素類化合物，對 321、325 和 335 nm 處的譜圖信息比較發現，在 325 nm 處各成分 具有良好的紫外吸收，基線平穩，且色譜圖信息更豐富。本實驗采用特征圖譜結合主成分分析法，可有效 地區分前胡、紫花前胡、硬前胡，并可以找出對整體差 異性貢獻比較大的化學成分，為選擇指標成分進行質 量控制提供了科學依據。