安石榴苷的含量測定-昆山舒美KQ500DE使用

阿那日五味散由石榴皮、肉桂、砂仁、蓽茇、干姜 ５味藥材組成，具 有 溫 胃、消 食 之 功，臨 床 上 主 要 用 于胃脘寒濕、消 化 不 良、腎 寒 腰 痛 等 癥 的 治 療。 石榴皮多酚具有保護胃內(nèi)粘膜的作用，石榴皮水浸 物能夠增強大鼠胃蛋白酶活性，促進膽汁分泌，安 石榴苷為其主要活性成分，具 有 抗 氧 化、抗 菌、 抗病毒、抑制腫瘤細(xì)胞增殖等活性。

１ 儀器與試藥 

１．１ 儀器 

ＬＣ－２０ＡＤ 型 高 效 液 相 色 譜 儀（日 本 島 津公司），ＳＰＤ－Ｍ２０Ａ 型 光 電 二 極 管 陣 列 紫 外 可 見 光檢測器（日本島津公司），ＮｅｗＣｌａｓｓｉｃＭＦ型分析 天平 （瑞 士 梅 特 勒－托 利 多 公 司，ｄ＝０．０１ ｍｇ），ＫＱ５００ＤＥ型超聲 波 清 洗 器（昆 山 市 超 聲 儀 器 有 限 公司，功率２５０ Ｗ，頻率１００ＫＨｚ），Ｍｉｌｌｉ－Ｑ 型艾柯 超純水儀（美國密理博公司），ＡｇｉｌｅｎｔＺＯＲＢＡＸＳＢ－ Ｃ１８（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）色譜柱（美國安捷倫 公 司 ），ＬＩＮＯＭＡＴ５ 型 半 自 動 點 樣 儀 （瑞 士 ＣＡＭＡＧ 公 司），ＥＰＲＯＳＴＡＲ３型 薄 層 色 譜 數(shù) 碼 成 像系統(tǒng)（瑞士 ＣＡＭＡＧ 公司）。 

１．２ 試 藥 

阿 那 日 五 味 散 （自 制 制 劑，批 號 ２０１７０９１５；２０１７１２０１；２０１８０２０８；２０１８０４１０；２０１８０６２５）， 安石榴苷對照品（成都曼斯特生物科技有限公司，批 號 ＭＵＳＴ－１８０３０５０１，純 度≥９８ ％），胡 椒 堿 對 照 品 （成都曼斯特生物 科技有限公司，批 號 ＭＵＳＴ－ １７０５１２１０，純度≥９８％），硅膠 Ｇ 板（青島海洋化工， 批號２０１８０４１２），硅膠 Ｇ 板（煙臺市芝罘黃務(wù)硅膠開 發(fā)試驗廠，批號２０１７１１０４），硅膠 Ｇ 板（安 徽 省 良 辰 硅源 材 料 有 限 公 司，批 號 ２０１８０３２８），甲 醇 （美 國ＳＩＧＭＡ 公 司，色 譜 純），水 為 純 化 水，試 劑 為 分 析純。 

２ 方法與結(jié)果 

２．１ 阿那日五味散中胡椒堿的ＴＬＣ鑒別 

稱取阿那 日五味散１．５ｇ，置于具塞錐形瓶中加入１０ｍＬ無水 乙醇，超聲３０ｍｉｎ，濾過，即得供試品溶液。取胡椒堿 對照品適量，加無水乙醇制成濃度為５００μｇ／ｍＬ的 對照品溶液。按照處方配比和制備方法，制備１．５ｇ 不含蓽茇的 陰 性 樣 品，同 法 制 得 為 陰 性 樣 品 溶 液。 分別取上述供試品溶液、陰性樣品溶液各４μＬ和對 照品溶液３μＬ，點于同一硅膠 Ｇ 板上，以甲苯－乙酸 乙酯－丙酮（７∶２∶１）作 為 展 開 劑 展 開，取 出，晾 干， 置于紫外燈３６６ｎｍ 下 檢 視，結(jié) 果 供 試 品 色 譜 圖 與 對照品色譜圖相同位置處顯相同顏色的斑點，陰性 樣品色譜圖中相同位置處無斑點，見圖１。

２．２ 阿那日五味散中安石榴苷的含量測定 

２．２．１ 對照品溶液的制備 

稱 取 安 石 榴 苷 對 照 品 適量，制成濃度為５３１μｇ／ｍＬ的甲醇溶液，備用。 

２．２．２ 供試品溶液的制備 

稱取阿那日五味散０．１ｇ， 置于５０ｍＬ容量瓶中，用甲醇超聲提取３０ｍｉｎ，放 至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，備用。 

２．２．３ 陰性 樣 品 溶 液 的 制 備 

稱 取 不 含 石 榴 的 阿那日五味散陰性樣品０．１ｇ，按“２．２．２”項下方法制備 陰性樣品溶液，備用。 

２．２．４ 色 譜 條 件 

ＡｇｉｌｅｎｔＣ１８色 譜 柱（４．６ ｍｍ× ２５０ｍｍ，５μｍ），流動相：甲醇（流動相 Ａ）－０．１％三 氟乙酸（流動相 Ｂ），梯度洗脫條件（０～１０ｍｉｎ：Ａ％ 為５％→２０％，１０～２５ｍｉｎ：Ａ％為２０％→４０％，２５～ ３５ ｍｉｎ：Ａ％ 為 ４０％ →６５％，３５～４０ ｍｉｎ：Ａ％ 為 ６５％），進樣量：１０μＬ，柱溫：３０℃，檢測波長：３７０ｎｍ， 流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ。

３ 討論 

在對蓽茇的 ＴＬＣ鑒別中，考察了不同檢 視條件、不同波長以及不同顯色劑對色譜結(jié)果的 影 響，結(jié) 果 表 明 在 紫 外３６６ｎｍ 直 接 檢視的效果優(yōu)于噴顯色劑后的檢視效果，最終確定 直接在紫外燈３６６ｎｍ 下檢視。 安石榴苷對 照 品 溶 液 紫 外－可 見 區(qū) 全 波 長 掃 描 結(jié)果顯示，安石榴苷于２５８ｎｍ、３７０ｎｍ 處均有較強 的紫外吸收，以２５８ｎｍ 為 檢 測 波 長 的 ＨＰＬＣ 圖 譜 表明樣品中的其他物質(zhì)峰與安石榴苷分離度不符合 色譜系統(tǒng)適用 性 的 要 求，在３７０ｎｍ 處 α－安 石 榴 苷 和β－安石榴苷響應(yīng)值雖相對較低，但二者與其它物 質(zhì)色譜峰分離度較好，因此確定安石榴苷的檢測波 長為３７０ｎｍ。

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