KQ-300DE的使用！小青龍顆粒中9種成分的含量分析

小青龍顆粒由麻黃、桂枝、白芍、干姜、細辛、炙甘草、法 半夏、五味子 8 味中藥組成，具有解表化飲、止咳平喘的功 效，用于風寒水飲、惡寒發熱、無汗、喘咳痰稀。上述 8 味 藥材均收錄于中國藥典 2015 年版，其中麻黃具有發汗散寒、 宣肺平喘、利水消腫的功效，標準中以鹽酸麻黃堿和鹽酸偽 麻黃堿的總量作為麻黃的定量指標;桂枝具有發汗解肌、文通經脈等功效，標準中以桂皮醛含量作為定量指標;細辛、干姜均具有散寒、溫肺化飲等作用，標準中以揮發 油含量作為這兩味藥材的定量指標，此外細辛中的細辛脂 素，干姜中的 6-姜辣素含量也分別作為質量控制指標;白芍 具有養血調經、柔肝止痛等功效，主要活性成分為芍藥苷; 炙甘草為甘草的的炮制品，具有補脾和胃、益氣復脈的功能，含量同甘草藥材，測定甘草苷和甘草酸的量;法半夏為 半夏經甘草、生石灰炮制而得，用于咳痰多喘、痰 飲 眩 悸 等，含量測定指標藥典中并未作出規定。半夏藥典采用電 位滴定法測定琥珀酸含量作為定量指標，文 獻 運 用 了 HPLC 法測定出法半夏中的鹽酸麻黃堿、甘草苷、甘草酸銨 和琥珀酸的含量較高;五味子具有收斂固澀、益氣生津、補腎 寧心的功能，標準以五味子醇甲含量控制其質量

1 儀器與試藥

Agilent1290 Infinity 型超高效液相色譜儀(美國安捷倫 公司)，包括二元泵，DAD 檢測器，自動進樣器;電子天平: XP205 型 (d = 0．01 mg)，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公 司;KQ-300DE 型數控超聲波清洗器(昆山舒美超聲儀器有 限公司);Milli-QAcademic 超純水儀(美國默克密理博)。 琥珀酸對照品(批號:110896-201602，純度:99．9%)、鹽 酸麻黃堿對照品(批號:171241-20150，純度:99．8%)、鹽酸偽 麻黃堿對照品(批號:171237-201510，純度99．8%)、芍藥苷對 照品(批號:110736-201741，純度95．7%)、甘草苷對照品(批 號:111610-201106，純 度93．7%)、甘草酸銨對照品 ( 批 號: 110731-201619，純 度 93%)、桂 皮 醛 對 照 品( 批 號: 110710- 201720，純 度 98．7% )、6-姜 辣 素 對 照 品 ( 批 號: 111833- 201705，純 度96．8% )、五味子醇甲對照品 ( 批 號: 110857- 201714，純度99．9%) 均購自中國食品藥品檢定研究院。法 半夏、麻黃、白芍、炙甘草、桂枝、干姜、五味子藥材購于亳州 市各藥房，經亳州市食品藥品檢驗中心牛靜中藥師鑒定，法 半夏為天南星科植物半夏 Pinellia ternata (Thumb．) Breit 干 燥塊莖的炮制加工品，麻黃為麻黃科植物草麻黃 Ephedra sinica Stapf 的干燥草質莖，白芍為毛茛科植物芍藥 Paeonia lactiflora Pall．的干燥根，炙甘草為豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch．干燥根和根莖的炮制加工品，桂枝為樟科植物 肉桂 Cinnamomum cassia Presl 的干燥嫩枝，干姜為姜科植物 姜 Zingiber officinale Ｒosc．的干燥根莖，五味子為木蘭科植物 華中五味子 Schisandra sphenanthera Ｒehdet Wils．的干燥成熟 果實，均符合中國藥典 2015 年版規定。小青龍顆粒(每袋裝 13g，四川泰樂制藥有限公司，批號分別為 171021、171107、 180112、180323、180417、180510)。水為超純水，乙腈為色譜 純(Fisher 公司)，其他試劑為分析純。

2 方法與結果

2．1 色譜條件

色譜柱:Agilent Zorbax C18(100 mm×2．1 mm，1．8 μm);流動相:乙腈(A)-0．1%磷酸溶液(B)，梯度洗脫(0 ～ 8 min，15% →22%A;8～10 min，22%→25%A;10～15 min，25%→35%A;15 ～20 min，35%→50%A;20 ～ 23 min，50%→60%A;23 ～ 24 min， 60%→15%A;24～25 min，15%A);流速:0．5 ml·min－1 ;檢測波 長:0～8 min，214 nm;8～ 15 min，237 nm;15 ～ 20 min，285 nm; 20～25 min，250 nm。柱溫:35℃;進樣量:1 μl。

2．2 混合對照品儲備液的制備

精密稱取各對照品適量(甘草酸重量 = 甘草酸銨重量/ 1．020 7)，置 50 ml 量瓶中，加甲醇超聲( 250 W，40 kHz) 30 min，放至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即配制成含琥珀酸 68．40 μg·ml －1 、鹽酸麻黃堿129．00 μg·ml －1 、鹽酸偽麻黃堿 85．60 μg·ml －1 、芍藥苷290．40 μg·ml －1 、甘草苷162．40 μg· ml －1 、甘草酸117．40 μg·ml －1 、桂皮醛58．80 μg·ml －1 、6-姜辣 素98．80 μg·ml －1 、五味子醇甲114．20 μg·ml －1 的混合對照 品溶液，備用。

2．3 供試品溶液的制備

取本品約1．0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲 醇 25 ml，稱定重量，超聲處理(250 W，40 kHz)30 min，放冷 稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，經0．22 μm的微孔 濾膜濾過，備用。

2．4 陰性樣品溶液的制備

按照小青龍顆粒的處方比例及制備工藝，分別制備不含 法半夏、麻黃、白芍、炙甘草、桂枝、干姜、五味子的陰性樣品， 按“2．3”項下方法分別制備陰性樣品溶液。

3 討論

在以甲醇體系作為流動相時，洗脫效果不理想，結果中 干擾峰較多，且難以除去，因此本試驗考慮以乙腈為流動相， 參考文獻，分別考察了水-乙腈、水-乙腈-冰醋酸、乙腈0．1%磷酸。結果顯示水-乙腈作為流動相時，鹽酸麻黃堿與 鹽酸偽麻黃堿分離效果較差，且雜質峰較多，在酸性體系中 有較大改善;以水-乙腈-冰醋酸為流動相時，在波長 214 nm 處待測成分峰面積變小，波長 250 nm 及 280 nm 段基線漂移 較明顯，這可能是冰醋酸最大吸收波長在 214 nm 附近，小于 250 nm 及 280 nm;磷酸溶液在 UPLC 中本底吸收較小，因此 以乙腈-0．1%磷酸作為流動相時，雜質峰較少，待測成分的洗 脫效果及峰型亦最佳。按中國藥典 2015 年版和文獻測定各成分時采用的波 長進行測定，結果顯示在 210 nm 段琥珀酸、鹽酸麻黃堿、鹽 酸偽麻黃堿的峰檢測有干擾，噪音較大，使用 214 nm 時 3 種 成分有較好吸收效果，末端吸收影響較小;237 nm 處芍藥 苷、甘草苷、甘草酸均有較大響應值;285 nm 同時滿足 6-姜 辣素、桂皮醛檢測要求且效果最佳。最終確定琥珀酸、鹽酸 麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿檢測波長為 214 nm，芍藥苷、甘草苷、 甘草酸檢測波長為 237 nm，6-姜辣素、桂皮醛檢測波長為 285 nm，五味子醇甲檢測波長為 250 nm。采用波長切換法保 證了 9 種活性成分達到最佳吸收。