KQ-500E在測定金銀花標準湯劑的使用

金銀花為忍冬科植物忍冬 Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或帶初開的花，具有清熱解毒、 涼散風熱等功效，用于瘸腫療瘡、喉痹、丹毒、 熱毒血病、風熱感冒、溫病發熱。主產于河南、 山東、河北等地，其主要成分有以綠原酸為代 表的有機酸類、環烯醚萜苷類、黃酮類、三萜皂 苷類等。

1 儀器與試藥

Agilent 1260 Infinity Ⅱ高效液相色譜儀(二極 管陣列檢測器/紫外檢測器，美國 Agilent 公司)； Shimadzu LC-20AD 高效液相色譜儀(紫外檢測 器)、AUW 220D 十萬分之一電子分析天平均來自 日本島津公司；ME204 萬分之一電子分析天平(瑞 士梅特勒公司)；JJ5000A 電子天平(常熟市雙杰測 試儀器廠)；HH-6 數顯恒溫水浴鍋(常州智博瑞儀 器制造有限公司)；KQ-500E 超聲清洗儀(昆山舒美超聲儀器有限公司)；HGJR-01 紅外加熱儀(河南中良 科學儀器有限公司)；LGJ-12 低溫冷凍干燥儀(北 京松源華興科技)；SB-1100 旋轉蒸發儀、東京理 化 A-1000S 真空泵均來自東京理化器械株式會社。 乙腈(色譜純，賽默飛世爾科技)，其余試劑均 為分析純，水為純凈水；綠原酸 ( 批號： 110753-201415；純度：96.2%)、木犀草苷(批號： 111720-201609；純度：94.9%)對照品購自中國食 品藥品檢定研究院；新綠原酸 ( 批號： wkq16050805；純度 98%)、隱綠原酸(批號： wkq16081903；純度 98%)、異綠原酸 B(批號： wkq16040902；純度 98%)、異綠原酸 A(批號： wkq16070203；純度 98%)、異綠原酸 C(批號： wkq16081905；純度 98%)對照品均購自四川維克 奇生物科技有限公司。 道地產區的金銀花藥材，來自河南封丘 3 批， 山東平邑 3 批，河北巨鹿 3 批，河南禹州 3 批， 河南密縣 3 批。15 批金銀花藥材經河南大學藥學 院張保國教授鑒定，均為忍冬科植物忍冬 Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或帶初開的花，產地來 源見表 1。按照 2015 年版中國藥典金銀花項下檢 測項目檢測均符合要求。


2 方法與結果

色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18(250 mm× 4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈(A)-0.1%乙酸水溶 液(B)；梯度洗脫：0~40 min，5%→29%A，40~ 41 min，29%→80%A，41~48 min，80%A；檢測 波長：327 nm；流速：1.0 mL·min?1 ；柱溫：35 ℃； 進樣量：10 μL。典型色譜圖見圖 1。分別精密稱取新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、 木犀草苷、異綠原酸 B、異綠原酸 A 和異綠原酸 C 對照品適量，各置于 10 mL 量瓶中，用甲醇溶解 并定容至刻度，搖勻，作為對照品儲備液；分別 精密量取對照品儲備液適量，置于同一 10 mL 量 瓶中，加甲醇定容至刻度，得質量濃度分別為新 綠原酸 47.8 μg·mL?1 、綠原酸 531 μg·mL?1 、隱綠 原酸 94 μg·mL?1 、木犀草苷 13.5 μg·mL?1 、異綠原酸 B 90 μg·mL?1 、異綠原酸 A 212 μg·mL?1 、異綠 原酸 C 213 μg·mL?1 的混合對照品溶液。金銀花是花類、清熱解毒 類藥材，其標準湯劑的提取方法如下，藥材取 100 g，煎煮 2 次，第 1 次加入飲片量 12 倍水，浸 泡 30 min，煮沸后煎煮 20 min，第 2 次加入飲片 量 10 倍水，煮沸后再煎煮 20 min；固液分離，趁 熱用 200 目濾布過濾，濾液迅速降溫；2 次煎液合 并減壓濃縮，濃縮溫度<50 ℃，濃縮至 80 mL 左 右，用低溫冷凍干燥機干燥成粉末。

3 討論

考察了甲 醇-水、乙腈-水、乙腈-0.01%乙酸水、乙腈-0.05% 乙酸水、乙腈-0.1%乙酸水幾種流動相系統，結果 以乙腈-0.1%乙酸水系統的分離效果較好，在該條 件下，各色譜峰分離度良好，保留時間適中。樣 品檢測時采用 DAD檢測器對供試品溶液進行紫外 190~400 nm 掃描，發現在 327 nm 下色譜峰數較多 且各峰之間分離度較好，所以選擇 327 nm 作為吸 收波長。陰性試驗中，未見各色譜峰干擾現象。 色譜柱考察了 Agilent Eclipse XDB-C18、日本 BeKMAN C18、Phenomenex Luna C18，選擇 Agilent Eclipse XDB-C18 色譜柱，各峰分離度、峰型較好。 金銀花樣品均為水提，超聲就能保證有效成分的 溶出完全，所以供試品制備方法選擇超聲提取， 所用溶劑分別考察了 30%，50%，70%，100%甲 醇，30%，50%，70%，95%乙醇，結果用 50%乙 醇作為提取溶劑時，各峰分離良好，且綠原酸提 取率最高。



 

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