KQ-300DB在洞庭碧螺春的鑒別分析的使用

碧螺春茶作為我國十大名茶之一，自古以來就受到了人們的廣泛關注和喜愛。碧螺春茶所含的茶多 酚、兒茶素、氨基酸等含量較高，而且味道鮮濃、口感醇厚。但是，隨著碧螺春產業的不斷發展與擴大， 當前洞庭碧螺春茶出現了產品品質參差不齊、假冒偽劣產品泛濫等諸多問題，嚴重影響了碧螺春茶產業 的可持續發展。因此，有必要對碧螺春茶進行質量評價和真偽鑒別，進而保護名優茶的獨特品質。

1) 采用各等級碧螺春春茶作為試驗樣品。樣品均來自蘇州市吳中區洞庭東山的6個廠家以及洞庭 西山的4個廠家，且包含特級一等、特級二等、一級、二級、三級等5個等級，按照洞庭碧螺春茶感官指標 的國家標準對廠家的各等級茶樣進行嚴格挑選，所有茶樣均采用自封袋進行獨立密封包裝，并將其存放 于-20 ℃冰箱中。將洞庭東山6個廠家的樣品依次標記為A、B、C、D、E、F，洞庭西山4個廠家的樣品依次 標記為G、H、I、J，此外，碧螺春茶的5個等級依次標記為T1、T2、1、2、3。

2) 試驗試劑主要為甲醇、丙酮、氯仿和無水乙醇等試劑，均為分析純。

3) 試驗主要設備為電子天平(SQP，賽多利斯科學儀器有限公司)；高速萬能粉碎機(FW100，天津市 泰斯特儀器有限公司)；數控超聲波清洗器(KQ-300DB，昆山市超聲儀器有限公司)；紫外-可見分光光 度計(UV-1800，日本島津公司)。

1) 樣品處理：將購買的碧螺春茶樣品用高速萬能粉碎機粉碎后，過60目篩，放于自封袋中備用。準 確稱取樣品0.300 0 g，置于25 mL具塞刻度試管中，加入95%甲醇20 mL，將試管進行密塞，超聲提取 40 min后過濾得到其濾液，取1 mL濾液置于100 mL容量瓶中并用95%甲醇定容，搖勻待測。

2) 測試條件：將待測的提取液用UV-1800紫外可見分光光度計以相應溶劑調整基線，并作為參比 溶液進行紫外光譜掃描，設定掃描波長范圍為190～400 nm，狹縫為1 nm，采樣間隔為0.2 nm，每個樣品 重復測定3次。

3) 提取溶劑優化：以AT2樣品為考察對象，準確稱取0.300 0 g樣品3份，置于25 mL具塞刻度試管 中，分別加入超純水、95%甲醇、95%乙醇、95%丙酮、氯仿各20 mL，超聲提取50 min后過濾得到其濾液， 并將各濾液分別稀釋10、25、50、100倍之后進行紫外光譜掃描測定。

4) 超聲時間優化。以AT2樣品為考察對象，準確稱取0.300 0 g樣品3份，置于25 mL具塞刻度試管 中，加入95%甲醇20 mL后密塞，分別超聲提取20 min、30 min、40 min、50 min后過濾得到其濾液，取1 mL 濾液置于100 mL容量瓶中并用95%甲醇定容，搖勻后進行紫外光譜掃描測定。

5) 精密度試驗：以AT2樣品為考察對象，采用上述樣品處理方法和測試條件進行紫外光譜掃描，重 復測定7次，計算吸收波長的平均相對標準偏差RSD，考察精密度。

6) 重復性試驗：以AT2樣品為考察對象，采用上述樣品處理方法處理樣品，分別稱取7份，以上述測試條件進行紫外光譜掃描，計算吸收波長的平均相對標準偏差RSD，考察重復性。

7) 穩定性試驗：以AT2樣品為考察對象，經本研究的試驗方法處理的樣品，分別在0、2、4、6、8、10、 24 h處理，以本研究的測試條件進行紫外光譜掃描，計算吸收波長的平均相對標準偏差RSD，考察穩定性。

洞庭碧螺春茶樣品分別用超純水、95%甲醇、95%乙醇、95%丙酮、氯仿等溶劑進行提取后，由紫外 光譜圖可知，以95%甲醇為提取劑的色譜吸收峰數目最多，表明洞庭碧螺春茶化學成分被提取的最充 分。而且當濾液稀釋100倍時特征峰明顯，有利于對不同碧螺春茶樣品進行區分，因此，選擇95%甲醇作 為最佳提取溶劑，并將濾液稀釋100倍后進行紫外光譜掃描。碧螺春茶樣品超聲提取時間分別為20 min、30 min、40 min、50 min后，超聲結果表明，當以95%甲 醇為提取劑的超聲時間為20 min時，吸收峰數目最少；30 min次之；當超聲40 min和50 min時，吸收峰數 目變化不大。因此，選擇最佳提取時間為40 min。紫外指紋圖譜是由于不同物質體系化學成分含量和不飽和程度的差異，導致峰形、峰高、峰面積等 具有差異，因而可通過對不同物質體系的紫外指紋 圖譜進行鑒別分析。50個碧螺春茶的紫外指紋圖譜 疊加后如圖1所示。由圖1可知，不同產地、不同等級 碧螺春茶之間原始圖譜的出峰位置和峰形相似，但 吸光度大小均具有差異。結果表明，各碧螺春茶樣品 之間的主要化學成分組成相似，但含量存在差異，具 有指紋特性。

將所測50個碧螺春茶樣品的原始紫外指紋圖譜數據導入UV-Probe 2.43中進行一階求導的處理， 然后分別將原始數據和一階求導后的數據導入SIMCA-P 14.0軟件進行單位方差換算(unit variance scaling)后，再進行主成分分析以及偏最小二乘判別分析。主成分分析法(PCA)是一種將原來反映樣品信息的多個變量進行整合，壓縮成少數幾個綜合變量， 可以用二維圖直觀反映樣品信息的統計分析方法。同時，它也是一種非監督模式識別方法。將碧 螺春茶樣品的原始紫外光譜數據和一階求導數據導入SIMCA-P 14.0軟件中，經過單位方差換算處理 后，進行主成分分析，用以區分碧螺春茶的不同產地和不同等級。偏最小二乘判別分析(PLS-DA)是一種監督模式識別方法，根據吸收值差異建立區別樣品模型。 它可以分別提取自變量和因變量中能最大代表其特性的潛在變量，并對潛在變量進行線性或非線性 回歸建模，最終來預測方法的可行性。將50個碧螺春茶樣品的紫外指紋圖譜的吸收波長和相應 的吸光值導入SIMCA-P 14.0軟件中，選擇PLS-DA進行分析。

1) 紫外光譜法具有操作方便、高效率、低成本等優點，已經被越來越多地應用到食品、制藥、化工等 領域。本試驗通過對50個碧螺春茶樣品進行紫外光譜掃描，將所得紫外指紋圖譜原始數據和一階求 導數據導入SIMCA-P 14.0軟件中進行主成分分析，據此反映樣品之間的相關性，同時利用具有監督模 式的偏最小二乘判別分析對潛在變量進行模型的建立，最終預測方法的可行性。

2) 通過試驗確定了碧螺春茶的最佳提取溶劑為95%甲醇，最佳提取時間為40 min。碧螺春茶紫外光 譜曲線重現性好、穩定性高。不同產地和不同等級碧螺春茶的紫外指紋圖譜峰形比較相似，但吸光度不 同，表明不同產地和不同等級之間的樣品化學成分含量有一定的差異。

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