KQ-300DB使用于小鼠抗焦慮作用研究

酸棗仁是中醫常用的養心安神藥，從古代醫書 記載和臨床用藥來看對酸棗仁的用法有生用和炒熟 用的習慣，但歷代醫家對生、炒酸棗仁功效主治說 法各有不同。著名老中醫施今墨先生將生酸棗 仁與炒酸棗仁作為藥對，二者配伍使用，其認為“熟 棗仁補肝寧心安神，生棗仁清肝寧心安神。二藥參 合，一補一清，清補合法，寧心安神的力量增強”。 三 重 復 合 實 驗 裝 置（Triple-test）是 2008 年 Andre Ramos 等提出的一種用于評價嚙齒類實驗動物 焦慮情緒和探索行為的復合實驗裝置，其整合了目 前公認的三種評價狀態焦慮動物模型的經典方法 （OFT+EPM+LDB），可以區分測量不同抗焦慮藥物 對不同種屬小鼠焦慮情緒和探索行為的影響，其最 顯著的特點是避免了傳統方法因測量而帶來的實驗 耐受性，同時利用動物模型的異質性，既可以從不同 角度綜合評價狀態焦慮動物模型，又平均化了這種 因異質性而帶來的誤差。

清潔級 ICR 小鼠，雄性，體質量 18~20 g，購于遼 寧長生生物技術有限公司。許可證號：SCXK（遼） 2015-0001。

生與炒酸棗仁合煎液：以 1∶1 比例稱取生與 炒酸棗仁粗粉各 250 g，加入 8 倍量的蒸餾水，浸泡 30 min，然后用電磁爐加熱，130 ℃加熱至沸騰后再 100 ℃下煎煮 80 min。16 層紗布過濾藥液，濾液用 旋轉蒸發儀濃縮至含生藥量 1 g/mL，放冰箱備用。 陽性對照藥：地西泮，2.5 mg/ 片，山東省平原制 藥廠，批號 100904。取兩片地西泮加蒸餾水超聲溶 解，定容到 100 mL 容量瓶中，即得 0.05 mg/mL 的混 懸液。

Mouse CORT ELISA Kit：R ＆ D Systems，Inc， Lot：E20161201A。

Triple-test 實驗裝置，見圖 1。實驗裝置由三個經典的焦慮模型測試裝置 連接組成：分別是曠場試驗（OF）、高架十字迷宮 （EPM）和明暗穿梭箱（LDB）。動物行為視頻分析系統：北京天鳴宏遠科技發 展有限公司，V3.20 版；分析天平：美國梅特勒 - 托 力多儀器上海有限公司，型號：MS204S；超聲波清洗儀：型號：KQ-300DB，昆山市超聲儀器有限公司； 恒溫水浴鍋：金壇華龍實驗儀器廠，型號：HH-S8； 多 功 能 酶 標 儀：美 國 伯 騰 儀 器 有 限 公 司，型 號： SynergyMx；高速低溫冷凍離心機：美國 TOMOS 有限 公司，型號：3-18R（3006004）

1.2 實驗環境控制條件

1.2.1 飼養環境

飼養環境為通風、避光、隔音、屏蔽狀態，采用 自動定時光控系統對小鼠的生活環境實行明暗光照 周期處理（12/12 h 明暗交替，早上 7：00 熄燈，晚上 19：00 開始照明，即晝夜顛倒）。室溫：（24±1）℃。 小鼠每 4 只一籠（30 cm×19 cm×13 cm），并在籠內 放置一 PVC 管（內徑直徑 4 cm，長 7.5 cm）構成豐富 環境，所有動物自由獲得食物和水。

同上。實驗期間，所有光照均來自 Triple-test 實 驗裝置的光源，使明區的光照強度為 640~1300 lux， 暗區的光照強度為 7~13 lux，高架迷宮的光照強度 為 2~4 lux，曠場的光照強度為 14~20 lux，Triple-test 實驗時間為 9：00-17：00。

實驗結果表明，與空白組比較，陽性組和生與 炒酸棗仁配伍組小鼠的曠場中央區運動時間百分 比、中央區運動距離和周邊區運動距離都沒有顯著 性變化（P>0.05）。實驗結果顯示，與空白組比較，陽性組和生與 炒酸棗仁配伍組小鼠進入高架十字迷宮開臂次數百 分比和在高架十字迷宮開臂停留時間百分比都有顯 著增加（P<0.01），陽性組小鼠進入高架十字迷宮閉 臂次數顯著增加（P<0.01），生與炒酸棗仁配伍組無 顯著變化（P>0.05）。實驗結果顯示，與空白組比較，陽性組和生與 炒酸棗仁配伍組小鼠在明暗穿梭箱明區運動時間百 分比顯著性增加（P<0.05）、在明暗穿梭箱穿梭次數 有極顯著性增加（P<0.01）。陽性組小鼠在明箱中運 動距離有顯著性增加（P<0.05），生與炒酸棗仁配伍 組小鼠有極顯著性增加（P<0.01）。陽性組和生與炒 酸棗仁配伍組小鼠在暗箱中運動距離與空白組比較 無顯著性變化（P>0.05）。

曠場實驗（OFT）、高架十字迷宮（EPM）和明 暗穿梭箱（LDB）是三種公認的用于評價和建立狀 態焦慮動物模型的經典方法，三種方法單獨使用 不能全面的反映實驗動物的焦慮狀態，但如果對 同一實驗動物連續應用三種方法會因測量的重復 性而帶來實驗耐受性。本研究采用 Andre Ramos于 2008 年提出的復合實驗裝置，其整合了目前 公認的三種建立狀態焦慮動物模型的經典方法 （OFT+EPM+LDB），其原理是利用嚙齒動物天性厭 惡明亮開闊的地區，但他們同時還有探索新鮮事 物（包括威脅和刺激）的特性，這種探索本性和外 界環境的矛盾沖突就造成了嚙齒類動物在實驗中 的焦慮情緒。