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云南重樓（又名滇重樓）Paris polyphylla Smith var. yunnanensis (Franch.) Hand. -Mazz. 為百合科 （Liliaceae）多年生草本植物，以其干燥根莖入藥，被 歷版《中國藥典》收錄，甾體皂苷類成分是其主要活 性成分，具有消腫止痛、清熱解毒、涼肝定驚等功 效，在云南省藥用植物資源中占據產業化利用主導 地位，是最具代表性和全局影響力的植物資源之一。 目前，滇重樓藥材的來源主要以采挖野生資源為主， 由于每年的消耗量遠遠超出野生資源的年再生能力， 加之滇重樓根莖生長極其緩慢，資源再生周期長（需 要 8～12 年），野生資源利用已經演變成為嚴重的資 源危機，滇重樓資源的可持續利用問題已經引起政 府、科研院所和相關制藥企業的高度關注和重視。 筆者前期在滇重樓樣品采集及研究中發現，在滇 西大理、麗江等滇重樓主要原料來源地，根據根狀莖 分枝情況不同滇重樓存在 2 種不同形態，一種是根狀 莖不分枝，另一種是《云南植物志》和《中國植物志》 沒有記載，根狀莖常分枝，少則根狀莖分為幾枝， 多則根狀莖分為幾十、上百枝，產地俗稱多莖重樓、 多芽重樓。多莖重樓與滇重樓相比，多莖重樓因為根 狀莖分枝多，葉片數多，葉面積大，光合作用能力強， 生長速度快，產量高，深受種植戶的歡迎，已經成為 滇重樓野生變家種及人工種植的重要品種。目前國內 外有關重樓藥材的品質評價主要集中在滇重樓和七 葉一枝花 Paris polyphylla Smith var. chinensis (Franch.) Hara，有關多莖重樓品質評價的研究報道較少，多莖重樓與滇重樓在根狀莖分枝上差異較大， 那么，二者在主要活性成分上是否存在差異？為此， 本實驗擬采用 HPLC 法測定不同產地多莖重樓根莖 中重樓皂苷 VII、H、VI、II、III、I、V 的含量測定， 建立其 HPLC 指紋圖譜，并與滇重樓對照藥材根莖 HPLC 指紋圖譜進行比較分析，探討不同產地多莖重樓與滇重樓品質及 HPLC 指紋圖譜差異，為多莖重樓 與滇重樓等同入藥提供依據。
Agilent 1260 型高效液相色譜儀（美國 Agilent 公 司）：包括 G1311CVL（四元泵）、G1313A（標準型自動進樣器）、G1330B（自動進樣器恒溫模塊）、 G1316A，G1316C（柱溫箱）、G1314BC/E/F DAD 檢 測器，ChemStation 色譜工作站（美國 AgIlent 公司）；超聲波清洗儀（昆山超聲儀器）；FY131 型中藥粉碎機（天津市泰斯特儀器公司）；電子天平（德國賽多利斯）。
重樓皂苷 VII、VI、II、I 對照品購自中國食品 藥品檢定研究院，批號分別為 111593-200402、 111592-200301、111591-200301、111590-200402， 質量分數均≥98%；重樓皂苷 H、III、V 對照購自 上海金德生物科技有限公司，批號分別為 20170109、20180606、20170217，質量分數均≥98%。 高效液相流動相乙腈為色譜純（美國 Tedia 公司）， 水為娃哈哈純凈水，提取樣品用乙醇為分析純。 2017 年 9 月種子成熟期，在多莖重樓和滇重樓 主要來源地采集樣品，多莖重樓樣品采集根狀莖分 枝數為 8～10 枝的植株（生長年限相近），滇重樓樣 品采集根狀莖節數為 8～9 個（生長年限相近）。樣 品經大理大學李海峰教授鑒定為百合科（Liliaceae） 重樓屬 Paris L. 滇重樓 Paris polyphylla Smith var. yunnanensis (Franch.) Hand. -Mazz.。分別到不同產地 采集多莖重樓 10 批（S1～S10）和滇重樓 11 批（A1～ A11），樣品去泥洗凈后于 40 ℃烘箱中恒溫干燥至 恒定質量備用，并將 11 批滇重樓作為對照藥材。多 莖重樓及滇重樓樣品信息見下表。
理 60 min，濾過，加 75%乙醇定容至刻度，得供試 品溶液。 2.1.4 專屬性考察 在“2.1.1”項色譜條件下， 分別取對照品溶液和供試品溶液進樣測定，得到 特征峰，供試品溶液與雜質分離良好，無干擾。2.1.5 線性關系考察 將對照品母液在“2.1.1”項 色譜條件下，分別進樣 1、5、10、15、20、25 μL， 分別測定重樓皂苷 VII、H、VI、II、III、I、V 對照 品峰面積。以對照品進樣量對峰面積進行線性回 歸，繪制標準曲線，得到回歸方程。同時以信噪比 3 和 10 為標準考察檢測限（LOD）和定量限（LOQ）。 2.1.6 精密度試驗 取“2.1.2”項中的對照品溶液 在“2.1.1”色譜條件下，每次進樣 10 μL，重復進 樣 6 次，測得重樓皂苷 VII、H、VI、II、III、I、V 的平均峰面積分別為 141.85、179.63、107.75、321.20、 263.43、257.55、229.15，RSD 分別為 0.66%、0.53%、 0.98%、0.86%、0.85%、0.65%、0.70%（n＝6），結 果表明精密度良好。
色譜柱為 Thermore C18（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動相為水（A）-乙腈（B），梯 度洗脫，0～8 min，20%～40% B；8～39 min，40%～ 44% B；39～49 min，44%～47% B；49～52 min， 47%～60% B；52～60 min，60%～20% B；檢測波 長 203 nm；柱溫 30 ℃；體積流量 1 mL/min；進樣 量 10 μL。 2.1.2 對照品溶液的制備 分別精密稱取重樓皂 苷 VII、H、VI、II、III、I、V 對照品，置 5 mL 量 瓶中，加色譜甲醇溶解并定容，配制成質量濃度分 別為 0.236、0.238、0.240、0.650、0.736、0.660、 0.248 mg/mL 對照品母液，在 4 ℃冰箱保存備用。 2.1.3 供試品溶液的制備 樣品粉碎，過 100 目篩， 40 ℃烘箱中干燥至恒定質量，精密稱取藥材粉末 0.5 g（萬分之一電子天平）于 10 mL 三角瓶中，加 入 75%乙醇 4 mL，于 60 ℃，53 kHz 超聲處理 60 min，濾過，濾液置于 10 mL 量瓶中；向藥材濾渣 中加 75%乙醇 4 mL，放置過夜，相同參數超聲處。
不同產地多莖重樓根莖主要活性成分含量比 較分析 不同產地多莖重樓根莖中 VII、H、VI、II、III、 I、V 及《中國藥典》2015 年版規定 4 種重樓皂苷 （I、II、VI、VII）的總含量，。對不同產地 的多莖重樓根莖中重樓皂苷 VII、H、VI、II、III、 I、V 及《中國藥典》2015 年版規定的 4 種重樓皂 苷（I、II、VI、VII）總量進行顯著性檢驗，結果 顯示，不同產地多莖重樓根莖中均檢測到《中國藥 典》2015 年版規定的 4 種重樓皂苷（I、II、VI、 VII），不同產地多莖重樓根莖中重樓皂苷（I＋II＋ VI＋VII）總量的范圍在 1.239%～6.236%，均大于 《中國藥典》2015 年版一部規定的 0.60%的質量控 制標準，含量最高的為 S6（劍川馬凳），最低的為S3（大理銀橋），相差 5 倍多；且 S6（劍川馬凳）、 S8（南澗樂秋）產地的（I＋II＋VI＋VII）總含量顯 著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01）高于其他產地； S6（劍川馬凳）產地多莖重樓根莖中重樓皂苷 VII、 H、VI、II、III、I、V 及 4 種重樓皂苷（I、II、VI、 VII）的總含量顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01） 高于其他產地；S6（劍川馬凳）、S8（南澗樂秋）重 樓皂苷 III 的含量分別為5.354%、4.710%，顯著（P＜ 0.05）或極顯著（P＜0.01）高于其他產地，且超過 S3（大理銀橋）含量的 42 倍多；除 S8（南澗樂秋）、 S9（巍山龍街）、S10（巍山魏寶山）外，其他產地 均未檢測到重樓皂苷 V；除 S2（云龍長新）、S3（大 理銀橋）、S9（巍山龍街）外其他產地均檢測到重 樓皂苷 H；不同產地多莖滇重樓主要成分含量存在 一定的差異，但總體品質較好。 一測多評法（QAMS）與外標法（EMS）測定 不同產地多莖重樓根莖主要活性成分含量比較分析 取 10 批多莖重樓根莖樣品，按照“2.1.3”項 下方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件 進樣測定，記錄各色譜峰峰面積，采用外標法對重 樓皂苷 VII、H、VI、II、III、I、V 進行定量測定， 再用所建立的 QAMS 法進行定量計算，以驗證 QAMS 法用于多莖重樓中多指標評價的準確性。測得結果顯示 2 種方法測得的各成分含量 無明顯差異，QAMS 法可以作為一種簡便準確的 質量評價模式，用于多莖重樓中 7 中甾體皂苷類主 要活性成分的含量測定。
