黑毛茶品質成分變化分析-KQ3200B使用

黑茶初制生產工序歷經殺青、揉捻、渥堆和干燥， 由此將茶樹鮮葉制得黑毛茶，黑毛茶再通過篩分、軋切、風選、拼堆、蒸壓、發花等精制工序加工成不同品 質風格的黑茶產品。中國茶葉流通協會報道了2018年全國黑茶產量為31.89萬 t，占比六大茶類總量的12.20%， 位居六大茶類第2位。由于生產黑茶的鮮葉原料采摘通 常較為粗老，加工成的黑毛茶需在庫房中存放1～2 a才能 進行精制，同時，售出的黑茶商品，消費者通常將其存 放一段時間以改善其粗澀的口感。在黑毛茶或成品黑茶 貯存過程中，如果遇到高濕高溫的環境條件，特別是南 方的梅雨季節，茶葉表面則極易滋生霉菌，輕者有風 霉味，重者失去飲用價值，甚至產生安全問題。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

將來源于黑茶生產企業的黑毛茶（2016年5月產于湖 南省桃源縣，一級，含水量（10.05±0.20）%）樣品盛 于培養皿（培養皿開口，每份培養皿15 g茶樣，分別置于 培養箱內5 層柵狀隔板上，每層12 份，合計60 份），并 置于生化培養箱進行促霉培養。培養條件：溫度25 ℃， 相對濕度90%。 人工促霉培養過程中分別按培養至第0、5、7、9、 11、13、15天依照柵狀隔板分層取樣混勻，－20 ℃密封 凍存。 從市場收集2 份自然霉變黑茶樣品（霉變茯磚茶： ZM1，霉變花卷茶：ZM2）用于真菌毒素的對照分析。 咖啡堿標準品（99%）、可可堿標準品（95%）、 茶堿標準品（99%）、沒食子酸標準品（90.34%）和 兒茶素標準品（DL-兒茶素（DL-catechin，DL-C）、 表沒食子兒茶素沒食子酸酯（epigallocatechin gallate，EGCG）、沒食子兒茶素沒食子酸酯（gallocatechin gallate，GCG）、表兒茶素沒食子酸酯（epicatechin gallate，EGC）、表兒茶素（epicatechin，EC）） 美國Sigma公司；70% ACCQ·TagTM洗脫液 美國 Waters公司；ML030104黃曲霉毒素B1（aflatoxin B1， AFB1）酶聯免疫試劑盒 上海酶聯生物科技有限公司； ACCC30899黃曲霉菌株 中國農業微生物菌種保藏管理 中心；超純水由Millipore純水儀制備；乙腈、乙醇、甲 醇、冰醋酸、N,N-二甲基甲酰胺均為國產色譜純，無水 乙醚為國產分析純。

1.2 儀器與設備

GZ-150-HSII恒溫恒濕箱 韶關市廣智科技設備有 限公司；PB303-N電子天平 梅特勒-托利多儀器有限 公司；LDP-350型高速多功能粉碎機 浙江永康市紅太 陽機電有限公司；XMTD-7000恒溫水浴鍋箱 上海精 宏實驗設備有限公司；N13462C移液器 德國Eppendorf 公司；昆山舒美KQ3200B超聲波清洗器 昆山超聲儀器有限公司；UV-2550紫外-可見分光光度計、LC-20AT高效液 相色譜儀 日本島津公司；ACCQ·TagTM氨基酸分析 色譜柱（3.9 mm×150 mm，5 μm） 美國Waters公司； ECOSIL-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm） 廣州綠 百草科學儀器有限公司；R-300旋轉蒸發儀 瑞士Büchi 公司；1290-6460液相色譜-串聯質譜儀 美國Agilent 公司；Aquelix 5超純水制備儀 美國Millipore公司； 35R超速離心機 德國Rotina公司；3001型酶標儀 美國Thermo公司。

1.3 方法

1.3.1 茶湯制備

準確稱取粉碎茶樣5.0 g于500 mL三角瓶中，加沸騰 蒸餾水450 mL，沸水浴浸提45 min，過濾，洗滌殘渣， 濾液合并于500 mL容量瓶中，冷卻后定容，搖勻，待 測。測定前待測樣過0.45 μm濾膜，取濾液上機待測。

1.3.2 水分及多酚總量測定

水分含量測定參考GB 5009.3—2016《食品中水分的 測定》；茶多酚含量測定參考GB/T 8313—2008《茶葉 中茶多酚和兒茶素類含量的檢測方法》。

1.3.3 高效液相色譜分析

兒茶素組分、嘌呤堿、游離氨基酸含量及沒食子酸 含量測參考劉建軍等的方法。 兒茶素及嘌呤堿含量測定色譜條件：ECOSIL-C18色 譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；檢測波長200 nm；進 樣量10 μL；柱溫40 ℃；流速1.0 mL/min；流動相A為超 純水，流動相B為40% N,N-二甲基甲酰胺溶液溶液。梯度 洗脫程序：0.01 min，9% B；10 min，14% B；15 min， 23% B；27 min，36% B；31 min，36% B；32 min，9% B；37 min，停止。游離氨基酸組分色譜條件：ACCQ·TagTM色譜柱 （3.9 mm×150 mm，5 μm）；檢測波長220 nm；進 樣量20 μL；柱溫37 ℃；流速1.0 mL/min；流動相A為 10% ACCQ·TagTM洗脫液，流動相B為60%乙腈溶液。 梯度洗脫程序：0.01 min，0% B；0.5 min，2% B； 15 min，7% B；19 min，10% B；32 min，33% B； 34 min，100% B；37 min，100% B；39 min，0% B； 42 min，0% B；42.01 min，停止。

2 結果與分析

氨基酸是茶湯呈味物質的主要構成之一，口感主要 體現為鮮爽味，氨基酸含量的高低對茶湯鮮爽味的呈現 起著很大的作用。如表1所示，氨基酸總量隨著霉變時間 的延長而逐漸降低，在霉變之初0～5 d降低最快，降低率 約為80.23%。茶氨酸為測定的18 種游離氨基酸組分中含 量最高的一類氨基酸，未霉變時約占游離氨基酸總量的 40.92%。在未霉變黑毛茶樣本中，含量前5的氨基酸組分 為茶氨酸、精氨酸、谷氨酸、天冬氨酸和蛋氨酸，霉變 第15天時排名前5的氨基酸組分為茶氨酸、天冬氨酸、谷 氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸。精氨酸和蛋氨酸含量在霉變 過程中降解速度很快，說明精氨酸較容易成為霉菌的氮 源而被霉菌所利用轉化。在18 種氨基酸組分中僅酪氨酸 含量略有增加，未見因霉菌生化代謝轉化而導致某類氨 基酸含量明顯上升的現象。采用最小顯著性差異法對茶 氨酸和18 種氨基酸總和在不同霉變時期的含量進行差異 顯著性分析。結果表明：茶氨酸從霉變起始至霉變第5天 時含量變化呈顯著性差異（P＜0.05）；18 種氨基酸總量 從霉變起始到霉變第7天時含量變化呈顯著性差異，霉變 第9～15天含量變化呈現顯著性差異。

3 討 論

黑茶品質化學多集中于品質形成機理研究，但對于 高濕霉變環境引起的黑茶品質劣變的研究較少。本研究 從高濕條件下誘導黑毛茶的霉變過程著手，模擬梅雨季 節的貯藏條件，研究霉變黑毛茶的主要品質成分變化規 律及真菌毒素殘留狀況。 黑毛茶霉變過程中，氨基酸和兒茶素類物質在霉變 初期（第0～5天）含量下降迅速，其中茶氨酸作為18 種 游離氨基酸組分中含量最高的氨基酸，其含量的變化是 霉變過程黑毛茶氨基酸下降的主要原因，實驗過程未檢 測到因霉菌生化代謝轉化而導致某類氨基酸含量明顯上 升的現象。從霉變起始至霉變第5天，茶氨酸和18 種氨基 酸總量分別下降了71.65%和78.67%，至霉變第15天時， 其含量僅為起始含量的12.31%和13.95%。表明霉變過程 對黑茶品質帶來了極大的影響。3 種嘌呤生物堿的總量 在霉變過程中基本保持穩定，茶堿在霉變過程中有所上 升，而咖啡堿則有所下降，兩者存在數量相關性，其原 因可能在于部分霉菌存在嘌呤堿之間的轉化能力。兒 茶素類組分主要以EGCG和EGC的含量降低為主，不含 沒食子酸基團的兒茶素（EC、DL-C）和非表型兒茶素 （GCG）含量變化不大。這表明，霉菌存在水解兒茶素 沒食子基團的能力，這在單體物質代謝研究中已經被證 明，但這種能力是否還受制于兒茶素的構型，有待 進一步實驗證明。茶多酚和沒食子酸含量在霉菌侵染的 過程中逐漸降低，表明該類物質能夠被霉菌所代謝和轉 化，具體的代謝轉化機制及通路有待進一步研究。



 

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