測定歸柏化瘀膠囊中芍藥苷含量-KQ-250DB使用

歸柏化瘀膠囊由當歸、黃柏、白芍、醋延胡索、甘草五味中藥 組成，具有活血化瘀、清利濕熱之功效，用于慢性非細菌性前列 腺炎血淤兼濕熱證，癥見尿頻，尿急，尿痛，尿道口常有少量黏 液，口苦，小便短黃。方中當歸主要含有機酸類、香豆素類、黃酮 類成分，其中阿魏酸具有抗血小板聚集，抑制血小板 5- 羥色胺 釋放，抑制血小板血栓素的生成，增強前列腺素活性，鎮痛，緩 解血管痙攣等作用。黃柏主要含小檗堿、黃柏堿等生物堿類 成分，具有抗細菌、真菌、病毒及其他病原微生物的作用。白 芍主要含苷類、萜類、黃酮類、鞣質類等，其主要有抗炎、抗菌、保 肝、鎮痛等 。

1 儀器和試藥

Agilent 1200 高 效 液 相 色 譜 儀，DAD 紫 外 檢 測 器，美 國 Agilent 公司；Mettler AE240 電子分析天平，瑞士 Mettler 公司； BSA224S-CW 型電子分析天平，德國 Sartorius 公司；Centrifuge 5415D 高速離心機；Milli-Q Academic 純水機，美國 Millipore 公 司；昆山舒美KQ-250DB 型超聲波清洗儀，昆山市超聲儀器有限公司。 歸柏化瘀膠囊（南京正大天晴制藥有限公司生產，批號：160401、160501、160601）；芍藥苷對照品（批 號：110736- 201704，含量以 94.9% 計）、阿魏酸對照品（批號：111787-201002 含量以 100% 計）均購自中國食品藥品檢定研究院。乙腈（色譜 純，美國天地公司），水為去離子水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為 Phenomenex Luna C18 色譜柱（4.6 mm×250 mm， 5 μm）；流動相：乙腈 - 0.1% 磷酸；流速：1.0 ml/min，梯度洗脫； 檢測波長：235 nm；柱溫：30℃ ；進樣量 10 μl。

2.2. 對照品溶液制備

分別精密稱取芍藥苷和阿魏酸對照品適量，加 50% 甲醇制 成每 1 ml 含芍藥苷、阿魏酸分別為 120.0μg、20.0 μg 的混合對 照品溶液。

2.3 供試品溶液制備

取裝量差異項下的本品內容物，混勻后，研細，取約 0.5 g， 精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入 50% 甲醇 25 ml，先稱定 重量，超聲處理（功率 250 W，頻率 40 kHz）30 min，待冷卻至室 溫后再次稱定重量，用 50% 甲醇補足減失的重量，混勻后濾過， 取續濾液，離心，作為供試品溶液。

2.4 定量限

按 2.1 項下上述色譜條件，取芍藥苷、阿魏酸對照品溶液， 逐級稀釋后，進行試驗， 結果芍藥苷、阿魏酸的定量限分別為 3.7ng （S/N ＝ 9.7），11.9 ng （S/N ＝ 10.5），檢測限分別為 0.42 ng （S/ N ＝ 3.2），0.33 ng （S/N ＝ 3.3）。

2.5 線性關系考察

精密稱取芍藥苷和阿魏酸對照品適量，制得每 1 ml 含芍 藥苷 1 042.4 μg、阿魏酸 125.6 μg 的混合溶液，依次精密量 取 混 合 對 照 品 溶 液 0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 ml 于 5 ml 量 瓶 內，加 50% 甲醇稀釋至刻度后，搖勻，注入液相色譜儀，測定， 以進樣濃度為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），繪制標準曲 線，回歸方程分別為 Y ＝ 746.74X － 202.92，r ＝ 0.999 9；和 Y ＝ 6 246.4X － 610.91，r ＝ 0.999 9。芍藥苷、阿魏酸分別在 20.848 ～ 416.960 μg/ml 和 2.512 ～ 50.240μg/ml 范圍內呈良 好的線性關系。

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

為讓待測成分獲得較好分離度，且具較高的靈敏度，采用 DAD 檢測器，在 200 nm 至 400 nm 范圍內掃描，選擇待測成分 最佳波長，最終選擇在 235 nm 檢測 2 個成分的含量。

3.2 色譜條件的確定

比 較 了 乙 腈 -0.1% 磷 酸、甲醇 - 水、乙腈 - 水三種流動 相系統，結果采用乙腈 - 0.1% 磷酸系統待測成分色譜峰峰形 較好，進一步優化洗脫條件，最終確定洗脫比例。進而又考察 了 0.8 ml/min、1.0 ml/min、1.2 ml/min 不 同 流 速 和 25 ℃、30 ℃、 35℃不同柱溫對待測成分的影響，結果在流速 1.0 ml/min 及柱 溫 30℃時分離效果最佳。比較了 Phenomenex Gemini C18 柱、 Waters C18 柱及 Agilent Extend C18 柱，結果在本方法的色譜條件 下，各待測成分分離效果最佳，分離度均大于 1.5。

3.3 專屬性考察

采用 DAD 檢測器，分別對供試品中芍藥苷和阿魏酸進行峰 純度驗證，結果峰純度均符合規定。同時制備缺當歸和白芍的 陰性供試品溶液，在芍藥苷和阿魏酸色譜峰位置無干擾峰，表明 所測定的芍藥苷和阿魏酸具有良好的專屬性。

3.4 供試品制備方法優選

考察了乙醇、80% 乙醇、50% 乙醇、甲醇、80% 甲醇、及 50% 甲醇等不同提取溶劑對 2 個成分提取效果，結果采用 50% 甲醇 作為提取溶劑時 2 個成分提取率最佳，固選擇 50% 甲醇作為提取溶劑。

4 結論

本研究建立的歸柏化瘀膠囊中芍藥苷和阿魏酸含量測定測 定方法，能夠有效用于評價本品質量。