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化學計量學是一門通過數學或統計學方法將對化學體 系的測量值與體系的狀態之間建立聯系的學科，它的特點 是可以最有效地獲取體系有用的特征數據，并通過解析測 量數據最大限度地從中提取有關物質的定性、定量、形態、 結構等信息。化學計量學不僅在數學領域應用廣泛，在 中藥鑒別、質量控制等研究中也越來越被接受和使用。 本研究運用化學計量學對不同采集地山楂葉藥材中采用面 積歸一化法所得 15 種成分的峰面積比例進行統計; 應用聚 類分析與主成分分析得到 30 批藥材; 利用判別分析建立質 量數學表達式。
1 儀器與材料
1. 1 儀器
安捷倫 1200 型高效液相色譜儀 ( 美國安捷倫 公司) ; AG-245 型分析天平 ( 瑞士梅特勒-托利多公司) ; LBY-N6K 型全自動血流變儀 ( 北京市普利生儀器有限公 司) ; KQ700 型超聲波清洗器 ( 昆山超聲儀器有限公司) 。
1. 2 動物
Wistar 雄性 SPF 級大鼠，體質量 200 ～ 220 g， 購于北京市維通利華實驗動物技術有限公司，動物生產許 可證號 SCXK ( 京) 2012-0001。
1. 3 試劑
金絲桃苷 ( 批號 111521-200303) ，購于中國食 品藥品檢定研究院; 牡荊素鼠李糖苷 ( 批號 151024) 、牡 荊素葡萄糖苷 ( 批號 151103) ，購于上海融禾有限公司， 上述對照品含有量≥98%。烏拉坦 ( 20150401) ，購于天津 光復精細化工研究所; 鹽酸腎上腺素 ( 批號 1505301) ，購 于天津市金耀藥業有限公司。乙腈、甲醇為色譜純，購于 美國 Fisher 公司; 水為娃哈哈純凈水; 其他試劑為分析純。
1. 4 試藥
山楂葉為薔薇科植物山楂 Crataegus pinnatifida Bge． 的干燥葉，由承德民族師范學院董建新教授鑒定為正 品，具體見表 1。山楂葉制法 A ( 模擬山楂葉成藥山玫 膠囊，山楂葉以 50%乙醇為提取液) 、山楂葉制法 B ( 山楂 葉藥材加 5 倍量 50%乙醇，加熱回流提取 2 次，合并提取 液用 3 倍量水飽和正丁醇溶液提取 3 次，合并的正丁醇提 取液濃縮至干，即得) 、山楂葉制法 C ( 模擬山楂葉成 藥益心酮片，以山楂葉提取物 D 為原料制成制劑) 、山楂葉制法 D ( 50%乙醇提取液，通過收集大孔吸附樹脂柱不 同體積分數乙醇洗脫液，回收乙醇得清膏) 。
2 方法與結果
2. 1 HPLC 法建立
2. 1. 1 色譜條件
Aglient Zorbax SB-C18 柱 ( 250 mm× 4. 6 mm，5 μm) ; 流動相 0. 1%甲酸水 ( A) -乙腈 ( B) -四 氫呋喃 ( C) ; 梯度 洗 脫 ( 0 ～ 5 min，10% ～ 12% B; 5 ～ 15 min，12%B; 15 ～ 20 min，12%B，前 20 minC 占 0。20 ～ 23 min，12% ～ 14% B; 23 ～ 35 min，14% B; 35 ～ 40 min， 14% ～ 20% B; 40 ～ 50 min，20% ～ 30% B; 50 ～ 60 min， 30% ～ 60%B; 60 ～ 65 min，60% ～ 80% B，20 min 以后 C 占 8%) ; 檢 測 波 長 320 nm; 體 積 流 量 1. 0 mL/min; 柱 溫 30 ℃ ; 進樣量 10 μL。
2. 1. 2 供試品溶液制備
精密稱取山楂葉 D ( 2015 年版 《中國藥典》方法) 約 0. 05 g，置 50 mL 具塞錐形瓶中，精 密移取 60%甲醇 25 mL，精密稱定質量，超聲處理 30 min， 待冷卻后補足減失質量，上清液以 0. 45 μm 微孔有機濾膜 過濾，即得。
2. 1. 3 對照品溶液制備
精密稱取金絲桃苷 15. 5 mg、牡 荊素 葡 萄 糖 苷 22. 0 mg、牡 荊 素 鼠 李 糖 苷 20. 0 mg，置 50 mL棕色量瓶中，甲醇溶劑定容，即得 ( 質量濃度分別 為 0. 31、0. 44、0. 40 mg /mL) ，密封備用。
2. 1. 4 樣品測定方法
按 “2. 1. 2”項下方法制備供試品 溶液，在 “2. 1. 1”項條件下進樣，色譜圖見圖 1。
2. 2 方法學考察
2. 2. 1 精密度試驗
取 “2. 1. 3”項下混合對照品溶液適 量，在 “2. 1. 1”項條件下連續進樣測定 6 次，測得金絲桃 苷、牡荊素葡萄糖苷、牡荊素鼠李糖苷峰面積 ＲSD 分別為 1. 88%、1. 06%、0. 95%，表明儀器精密度良好。
2. 2. 2 穩定性試驗
取 “2. 1. 2” 項下供試品溶液 ( 24 號) 適量，在 “2. 1. 1”項條件下于 0、2、4、8、12、24 h 測定，測得金絲桃苷、牡荊素葡萄糖苷、牡荊素鼠李糖苷 峰面積 ＲSD 分別為 1. 45%、1. 04%、0. 78%，表明供試品 溶液在 24 h 內穩定性良好。
2. 2. 3 重復性試驗
取 同 一 批 樣 品 ( 24 號) 適 量，按 “2. 1. 2” 項下方法制備供試品溶液，平 行 6 份，在“2. 1. 1”項條件下進樣，測得金絲桃苷、牡荊素葡萄糖苷、 牡荊 素 鼠 李 糖 苷 峰 面 積 ＲSD 分 別 為 1. 49%、0. 88%、 0. 52%，表明該方法重復性良好。
2. 2. 4 加樣回收率試驗
取同一批樣品 ( 24 號) 適量， 分別加入一定量的金絲桃苷、牡荊素葡萄糖苷、牡荊素鼠 李糖苷，按 “2. 1. 2”項下方法制備供試品溶液 6 份，在 “2. 1. 1”項條件下進樣，測得金絲桃苷、牡荊素葡萄糖苷、 牡荊素 鼠 李 糖 苷 加 樣 回 收 率 分 別 為 99. 43%、99. 66%、 99. 80%，ＲSD 分 別 為 2. 20%、1. 16%、0. 51%，結 果 與 2015 版 《中國藥典》標準符合。
3 討論
山楂葉質量標準包括 性狀鑒定、薄層色譜鑒別以及山楂葉總黃酮和金絲桃苷的 測定。目前的質量標準存在質控指標單一，與藥效關聯性 不強等問題。本研究在課題組成果-山楂葉指紋圖譜基礎 上，以中藥多組分作用特點，盡可能多的選取色譜峰為研 究目標，同時采用面積歸一化法測定了指標成分的比例值， 面積歸一化法可體現每種成分所占總成分的含有量百分比， 與中藥多組分、多靶點的作用特點相呼應。本實驗又利用 化學計量學中聚類分析和主成分分析法，以指標成分比例 值為分析目標，從不同采集地中排除安徽、廣東乳源、廣 東南昆山、廣西桂林、廣西賀州、廣西梧州、廣西玉林及 山東維安，最終剩余多個采集地的山楂葉質量可靠、穩定。 篩選出的山楂葉樣品采用判別分析，建立了質量數學表達 式，如有未知質量的山楂葉樣品，可把每個色譜峰面積比 例值直接帶入數學式中，當 Y 值范圍在 13. 15 ～ 16. 08 時， 未知山楂葉質量符合要求，該藥材質量評價的方法簡便、可靠。
