腫節風高效薄層色譜分析

腫節風為金粟 蘭科植物草珊瑚 Sarcandra glabra ( Thunb．) Nakai 的 干 燥 全 草，具有顯著的抗菌、消 炎、抗腫瘤作用，臨床療效確切，已知活性成分有異 嗪皮啶等香豆素類和迷迭香酸等有機酸類，此外還 有黃酮、倍半萜和揮發油等。2015 年版 《中國藥典》 及相關報道中有關腫節風的薄層鑒別大多僅檢測了 指標成分異嗪皮啶，一般均采用傳統 TLC 法，在實際操 作過程中發現部分斑點間重疊，不能得到很好的分離，未 能充分反映該藥材信息，從而影響了方法靈敏度，而且 《中國藥典》采用甲苯展開系統，毒性較大。因此，本研 究在 2015 年版 《中國藥典》基礎上，通過展開條件的優 化尋找極性合適、毒性較小的溶劑替代甲苯，探索專屬性 強、靈敏度高的腫節風高效薄層色譜 ( HPTLC)  鑒別 方法。

BP211D 電 子 天 平 ( 十 萬 分 之 一，德國賽多利斯公司) ; KQ3200E 超 聲 波 清 洗 器 ( 昆山市超聲儀器有限公 司) ; 定量毛細管 ( 美國 Dummond 公司) ; 硅膠 G60 高效 薄層板 ( 德國 Merck 公司) ; 硅膠 G60 薄層板 ( 德國 MN 公司) ; 硅膠 G60 薄層板 ( 山東煙臺維啟化工產品有限公 司) 。異嗪皮啶 ［薩恩化學技術 ( 上海) 有限公司，批號 BI180108，含有量 97. 86%］; 迷迭香酸 ( 美國 Sigma 公司， 批號 MKBQ 2631V，含 有 量 98. 74%) ; 腫節風對照藥材 ( 廣州市藥品檢驗所，批號 121048-201205) 。所用試劑均為 分析純。 13 批藥材 ( S1 產自河北，S2 ～ S3 產自浙江，S4 產自 重慶，S5 產自四川，S6～ S9 產自江西，S10 產自福建，S11 產自廣東，S12～ S13 產自廣西) 均由廣州市藥檢所中藥室顧利紅主任藥師鑒定為正品。

取藥材粉末 2 g，加 50 mL 水超聲 處理 30 min，濾過，濾液加乙酸乙酯振搖提取 2 次，每次 25 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加 1 mL 甲醇溶解， 即得。

取異嗪皮啶、迷迭香酸 對照品適量，加甲醇制成每 1 mL 分別含 0. 5 mg 2 種成分的 相應溶液。另取對照藥材粉末 2 g，按 “2. 1”項下方法制 備相應溶液。

以異嗪皮啶、迷迭香酸對照品溶液和 對照藥材作為參照，將藥材供試品溶液 ( S7) 點于同一塊 硅膠 G60 高效薄層板上，選擇了 3 種展開溶劑，置紫外燈 ( 365 nm) 下檢視，。當采用 2015 年版 《中國 藥典》展開劑，即甲苯-乙酸乙酯-甲酸 ( 9 ∶ 4 ∶ 1) 時，薄 層圖譜上半部分成分未能很好展開; 展開劑為環己烷-乙酸 乙酯-甲酸 ( 7 ∶ 6 ∶ 1) 時，薄層色譜圖中上半部分成分的 分離有所改善; 當展開劑為環己烷-乙酸乙酯-甲酸 ( 4 ∶ 5 ∶ 1) 時，薄層色譜圖中大部分成分均能得到很好分離， 比移值適中，而且環己烷毒性比甲苯小，故采用環己烷-乙 酸乙酯-甲酸 ( 4 ∶ 5 ∶ 1) 作為展開劑。

參照薄層色譜法 ( 2015 年版 《中 國藥典》一部附錄Ⅵ B) 試驗，吸取供試品、對照品、對 照藥材溶液各 2 μL，分別點于同一硅膠 G60 高效薄層板 上，以環己烷-乙酸乙酯-甲酸 ( 4 ∶ 5 ∶ 1) 為展開劑，展 開，取出，晾干，置紫外燈 ( 365 nm) 下檢視。結果供試品色譜在與對照藥材、對照品相應位置上顯示相同顏色 的熒光斑點。

取藥材供試品溶液 ( S7) 、異嗪皮啶 對照 品 溶 液 ( 0. 5 mg /mL ) 、 迷迭香酸對照品溶液 ( 0. 5 mg /mL) 、對照藥材溶液各 2 μL，在 “2. 4”項條件下展開，表明供試品色譜在與對照藥材、對 照品相應位置上顯示相同顏色的熒光斑點。置氨蒸汽中熏 10 min時，與對照品色譜相應的斑點變為黃綠色，即異嗪 皮啶，表明方法專屬性良好。

考察了用石油醚、甲醇、水超聲提 取后腫節風的薄層色譜圖，結果表明用有機溶劑提取后色 譜圖上部分可看到許多紅色熒光斑點，提示色素類成分較 多; 采用水提取處理時背景較為干凈，雜質斑點干擾較少， 故選擇該方法。

前期比較了點樣量 1、2、4、8、10 μL， 發現 1 μL 時部分斑點不清晰，而超過 2 μL 時色譜峰出現 超載現象，分離度較差，故選擇點樣 2 μL。

比較不同溫度 ( 4、25 ℃ ) 下 的薄層色譜圖，結果表明溫度對薄層色譜無顯著性影響。 然后，比較不同相對濕度 ( 20%、72%) 下的薄層色譜圖，結果表明隨著相對濕度的增大，色譜圖上半部分分離度有 所下降，提示實際操作過程中應注意控制相對濕度。

采用高效薄層板的色譜圖中， 異嗪皮啶對照品在 365 nm 下可檢測到 2 個斑點，而在普通 TLC 板中只看到 1 個，一方面提示該對照品可能存在雜質 或者同分異構體，另一方面則提示 HPTLC 法分離度更高。 另外，肉眼觀察比移值較低的斑點面積較大，為進一步確 證，將薄層板置氨蒸汽中熏 10 min，再在 365 nm 下檢視， 發現對照品色譜相應的斑點變為黃綠色，即異嗪皮啶，從 而確證比移值較低的斑點為異嗪皮啶。

HPTLC 法采用更細、更均勻的改性 硅膠和纖維素作為固定相，其分離度和靈敏度明顯優于普 通 TLC 法。該方法主斑點清晰，易于檢出，專屬性強， 靈敏度高，穩定性好，同時檢測了指標成分異嗪皮啶和抗 炎活性成分迷迭香酸，能更全面地反映腫節風質量。