羌活體內(nèi)外抗炎作用差異-昆山舒美KQ-400KDE使用

羌活為傘形科植物羌活 Notopterygium incisum Ting ex H. T. Chang或?qū)捜~羌活N. forbesii H. de Boiss.的干燥根莖及根，具有祛風(fēng)止痛等功效，臨床多 用于外感所致頭身關(guān)節(jié)疼痛、風(fēng)濕痹痛等。

1 儀器與材料 

1.1 儀器 

CPA225D 電子天平（德國 Sartorius 公司）； 昆山舒美KQ-400KDE 超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限 公司）；DFT-50A 粉碎機(jī)（溫嶺市林大機(jī)械有限公 司）；SHB-3A 循環(huán)水多用真空泵（鄭州杜甫儀器 廠）；SB-2000 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海愛朗儀器有限公 司）； ALPHA 2-4 LSC plus 真空冷凍干燥機(jī)（德國 Christ 公司）；5424R 冷凍離心機(jī)（德國 Eppendorf 公司）；3-18N 臺式高速離心機(jī)（湖南恒諾儀器設(shè)備 有限公司）；?80 ℃冰箱（美國 Thermo Forma 公司）； DZKW-4 電熱恒溫水浴鍋（北京中興偉業(yè)儀器有限 公司）；HERAcell vios 160i CO2培養(yǎng)箱（美國Thermo Scientific 公司）；CKX53 倒置光學(xué)顯微鏡（日本Olympus 公司）；1300 SERIES A2 生物安全柜（美 國 Thermo Scientific 公司）；Spectramax i3x 酶標(biāo)儀 （美國 Molecular Devices 公司）。 

1.2 藥品與試劑 

阿司匹林腸溶片（批號 20171202，沈陽奧吉娜 藥業(yè)有限公司）；生理鹽水；乙醇（分析純，北京化 工廠）；甲醇（分析純，北京化工廠）；二甲苯（分 析純，北京化工廠）；DMEM 培養(yǎng)基（美國 Corning 公司）；胎牛血清（FBS，美國 Corning 公司）；青 霉素-鏈霉素（PS，美國 Invitrogen 公司）；磷酸鹽 緩沖液（PBS，江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司）； 二甲基亞砜（DMSO，美國 VWR Life Science 公司）； CCK-8 試劑盒（上海東仁化學(xué)科技有限公司）；LPS （美國 Sigma 公司）；NO 檢測試劑盒（碧云天生物 技術(shù)有限公司）；小鼠腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、 白細(xì)胞介素-6（IL-6）ELISA 試劑盒（美國 Proteintech 公司）。 羌活藥材來源于四川蠶羌、甘肅臨洮縣玉林鎮(zhèn) 條羌、甘肅漳縣金鐘鎮(zhèn)大頭羌。經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué) 孫志蓉教授鑒定為傘形科植物羌活 Notopterygium incisum Ting ex H. T. Chang 或?qū)捜~羌活 N. forbesii H. de Boiss. 的干燥根莖及根。 

1.3 實(shí)驗動物與細(xì)胞 

SPF 級雄性昆明種小鼠，體質(zhì)量（20±2）g，購 于北京斯貝福生物技術(shù)有限公司，動物使用許可證 號 SCXK（京）2016-002。RAW 264.7 細(xì)胞購自北 京協(xié)和醫(yī)學(xué)院細(xì)胞庫。 

2 方法 

取羌活原藥粉末 50 g，分別加入 8 倍量乙醇加 熱回流提取 3 次，每次 1 h，濾過，合并濾液，回收 乙醇得到膏狀物，蒸餾水溶解稀釋為 1 g/mL 的濃縮 液，置于冰箱 4 ℃儲存?zhèn)溆茫糜隗w內(nèi)實(shí)驗。主要 成分綠原酸、紫花前胡苷、阿魏酸、羌活醇和異歐 前胡素的測定方法及具體含量。 取羌活原藥粉末，分別精確稱取 5 g，加 10 倍 量甲醇溶液加熱回流提取 30 min，濾過，取續(xù)濾液 濃縮并置于真空冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行真空冷凍干燥，得凍干粉。精密稱量 100 mg 羌活凍干粉，加入適 量 DMSO 溶液使其溶解完全，配制成 100 mg/mL 的母液，保存在?20 ℃?zhèn)溆谩＜铀幥埃僖?DMEM 無血清培養(yǎng)基（僅含 1%青霉素-鏈霉素）稀釋至不 同濃度（DMSO 終質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0.1%），經(jīng) 0.22 μm微孔濾膜過濾除菌，即得，用于體外實(shí)驗。主要成 分綠原酸、紫花前胡苷、阿魏酸、羌活醇和異歐前 胡素的測定方法及具體含量。

3 結(jié)果

二甲苯致小鼠耳腫脹急性炎癥實(shí)驗結(jié)果見表 1。由結(jié)果可知，與模型組比較，蠶羌和大頭羌對小 鼠耳腫脹有顯著的抑制作用（P＜0.05），且與阿司 匹林組比較，差異不顯著；條羌對小鼠耳腫脹無顯 著的抑制作用。

264.7 細(xì)胞活力的影響 羌活 對 RAW 264.7 細(xì)胞活力影響結(jié)果見圖 1。由結(jié)果可 知，蠶羌、大頭羌、條羌醇提物在 10～80 μg/mL 對 RAW 264.7 細(xì)胞活力無顯著影響（細(xì)胞存活率＞ 95%）。因此，在后續(xù)實(shí)驗中，可將待測樣品的質(zhì)量 濃度控制在 10～80 μg/mL。

4 討論 

炎癥是機(jī)體對于損傷性刺激做出的復(fù)雜自然性 防御反應(yīng)，且能夠激發(fā)免疫系統(tǒng)，引起血管舒張、 血液流動性增加、炎癥介質(zhì)釋放、細(xì)胞代謝增加等。二甲苯是常用的化學(xué)致炎劑，可誘導(dǎo)組胺、 激肽及纖維蛋白溶解酶等炎癥介質(zhì)釋放，進(jìn)而引起 局部毛細(xì)血管通透性的增加、炎癥細(xì)胞的浸潤、急 性滲出性炎性水腫等。NO 是一種重要的炎癥介 質(zhì)，在炎癥發(fā)生初期可以清除病原體為機(jī)體提供保 護(hù)措施，但過量的 NO 會與超氧陰離子（O ? 2 ）反 應(yīng)生成過氧化亞硝酸鹽，導(dǎo)致局部組織損傷，促進(jìn) 炎癥疾病的發(fā)生。

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