聚氰胺是一種重要的氮雜環(huán)有機(jī)化工原料，水溶液顯弱堿性，能溶于甲醇、乙酸等，微溶于水和乙醇，不溶于乙醚、苯等，而且在傳統(tǒng)C-18柱上保留很差。利用此特性，人們普遍采用離子對(duì)試劑液相色譜法和液質(zhì)聯(lián)用方法進(jìn)行檢測(cè)。但由于食品基質(zhì)復(fù)雜，使得樣品的處理甚關(guān)鍵。我們采用三酸提取，固相萃取小柱 凈化，輔以固相萃取儀操作，建立一套快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性良好的樣品外理方法。
主要儀器與試劑
高效液相色譜儀、配四元梯度泵、在線真空脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測(cè)器、固相萃取儀、超聲波清洗器、離心機(jī)、固相萃取小柱：OASIS MCX，6mL，500mg。三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，純度99%。
樣品處理
提取：準(zhǔn)確稱取經(jīng)粉碎混勻后樣品5.0g，加入50mL1%三氯乙酸溶液及2mL2%乙酸鉛溶液，混勻后超聲提取30min，高速離心后取上清液待凈化。
凈化：將固相萃取小柱(6mL，500mg)置于固相萃取儀樣品架上，分別加入5mL甲醇、5mL水活化，再準(zhǔn)確移取5.0mL離心液上柱。活化及上樣時(shí)，將樣品架升至頂部通過(guò)調(diào)節(jié)面板旋鈕來(lái)調(diào)節(jié)N2氣流小，控制流速不超過(guò)1mL/min。然后再用5mL水、5mL甲醇洗滌SPE柱，棄去洗脫液，將小柱升至頂部調(diào)節(jié)氣閥旋鈕自動(dòng)加壓吹干小柱，用5%氨水甲醇溶液5mL洗脫，收集洗脫液用氮吹儀吹干，用甲醇-水(2:8,V/V)定容至1.0mL,過(guò)0.45μm濾膜,上機(jī)測(cè)定。
樣品提取與凈化
三氯乙酸具有沉淀乳及其制品中蛋白質(zhì)的作用,而且有助于三聚氰胺的溶解.由于三聚氰胺呈弱堿性。(弱陽(yáng)離子化合物)，采用陽(yáng)離子交換柱進(jìn)行凈化可達(dá)到去除雜質(zhì)，提高檢測(cè)靈敏度、重現(xiàn)性和回收率的效果。
固相萃取儀的應(yīng)用
固相萃取儀具有高效、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)。它可通過(guò)該裝置中的氣流調(diào)節(jié)閥來(lái)控制小柱流速的大小，并可直接吹干小柱，保證每小柱在活化洗脫過(guò)程中具有良好的重現(xiàn) 性。并且可配套不同規(guī)格的固相萃取小柱(如1mL，3mL，6mL等)使用，一次操作可同時(shí)處理48個(gè)樣品。我們?cè)谀谭壑刑砑?2.0～50.0) ug/mL等不同濃度的三聚氰胺，進(jìn)行加標(biāo)回收和重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)，回收率在95～99%之間。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于3%。
結(jié)論
固相萃取儀的加壓操作是通過(guò)在固相萃取小柱的上方施加一定壓力空氣或N2來(lái)實(shí)現(xiàn)。
這樣可加快過(guò)濾速度，控制柱子活化、淋洗、洗脫全過(guò)程的流速，使溶液易于進(jìn)入固定相孔隙，有利于樣液與固定相緊密接觸，從而提高萃取效果。它克服常規(guī) 的手動(dòng)固相萃取操作費(fèi)時(shí)、不能確保穩(wěn)定的流速、不同人員操作結(jié)果偏差較大的問(wèn)題，通過(guò)簡(jiǎn)單的控制消除人為操作的誤差，保證在短時(shí)間內(nèi)同時(shí)處理幾十個(gè)樣品并具有良好的重現(xiàn)性。
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