昆山舒美分析定調經滋陰合劑中兩種指標性成分

調經活血合劑系筆者所在單位婦科臨床驗方 基礎上經改進制成的院內制劑，目前仍處于研發階 段。該制劑由黃芪、墨旱蓮、續斷、肉蓯蓉、枸杞子、 菟絲子等多味藥材經煎煮制備，具有調經活血，滋 陰補氣，安神調和的功效，主治月經不調、陰陽兩虛 和更年期綜合征等病癥。該制劑藥味較多，所含 化學成分多種多樣，單純對原料藥材進行檢測，難 以準確表征全方制劑的質量信息。為全面把握調 經活血合劑的質量，建立多指標含量測定方法成為 較準確和可靠的途徑。

1 儀器和材料

1.1 儀器

Waters 2695 高效液相色譜儀，配備 PDA 檢測器（美國 Waters 公司）；昆山 KQ3200 超聲清洗 儀（昆山舒美超聲儀器廠），力晨 HH-2 恒溫數顯水 浴鍋（中國常州諾基儀器有限公司），MettLer-ToLedo精密分析天平（瑞士MettLer-ToLedo公司）。

1.2 試劑、試藥和材料

HPLC分析所用乙腈、冰醋酸 為色譜純，購自Merck（德國）；供試品制備所用乙酸乙酯、甲醇為分析純，購自廣州化學試劑廠（中國）； 毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品（批號130709-201308） 和木犀草素（批號102201-201011）購自中國食品藥 品檢定研究院（中國）；色譜分析和調經活血合劑制 備所用純凈水為 Watsons 純凈水（中國），所用藥材 購自本地藥材市場。

2 方法與結果

2.1 供試品溶液的制備

精密吸取調經滋陰合劑 30mL，置 125mL 分液漏斗中，精密吸取乙酸乙酯 20mL，加入分液漏斗中萃取，共萃取兩次，分取乙酸 乙酯層，合并，揮干，殘渣加甲醇 20mL 復溶，以 0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.2 對照品溶液的制備

取毛蕊異黃酮葡萄糖苷和 木犀草素對照品，精密稱定，置10mL量瓶中，加甲 醇溶解并定容至刻度，即得兩種對照品含量均為 500μg/mL的對照品溶液。

2.3 色譜條件

使用 Thermo HypersiL C18 色譜柱 （4.6×250mm,5μm），乙腈為流動相 A，2%冰醋酸為流動相 B，梯度洗脫，程序為：0-15min，5-15% A； 15-40min，15-25%A；40-45min，25-70%A；45-55min， 70-90%A；55-60min，90-5%A。流速 1.0mL/min，柱 溫25℃，進樣量10μL，檢測波長300nm，供試品和對 照品色譜圖見圖1.

2.4 方法學驗證

2.4.1 標準曲線和線性

精密吸取“2.2”項下制備的 對照品溶液適量，置10mL量瓶中，分別加甲醇稀釋 并定容至刻度，即得毛蕊異黃酮葡萄糖苷和木犀草 素對照品含量均為 200、100、50、20、10、5μg/mL 的 溶液。吸取上述溶液，按“2.3”項下方法進HPLC分 析，測定峰面積，以對照品濃度為橫坐標x，毛蕊異 黃酮葡萄糖苷和木犀草素峰面積為縱坐標y，代入 ExceL進行線性回歸。結果顯示，毛蕊異黃酮葡萄 糖苷回歸方程為 y=26072x-60322（r 2 =0.9997）；木犀 草素回歸方程為 y=18067x-21706（r 2 =0.9996）；表明 方法線性關系良好，能夠在200-5μg/mL濃度范圍內 對兩種指標性成分進行準確定量。

2.4.2 精密度考察

取“2.1”項下制備的供試品溶液， 照“2.3”項下方法進HPLC分析，記錄峰毛蕊異黃酮 葡萄糖苷和木犀草素面積，計算 RSD。結果顯示， 毛蕊異黃酮葡萄糖苷峰面積的RSD為2.71%，木犀 草素峰面積的RSD為1.54%，表明方法精密度良好。

2.4.3 提取回收率考察

精密吸取調經滋陰合劑 25mL，置50mL量瓶中，按表1-1、1-2所述最終含量 加入對照品溶液適量，再加蒸餾水定容至刻度，取 所得溶液 30mL，照“2.1”項下方法處理，再按照“2.3”項下方法進 HPLC 分析，測定峰面積，計算毛 蕊異黃酮葡萄糖苷和木犀草素的含量，回收率和 RSD。結果顯示，毛蕊異黃酮葡萄糖苷的平均回收 率為99.0%，RSD為1.98%；木犀草素的平均回收率 為100.39%，RSD為2.24%；表明方法準確度良好。

3 討論

供試品制備方法中，筆者曾對提取方式、提取 溶劑進行了考察，情況如下：分別考察了超聲和萃 取兩種提取方式，前者將溶劑揮干后，殘渣加甲醇 25mL超聲。結果顯示，所得色譜圖中，超聲制備的 供試品溶液干擾峰較多，且毛蕊異黃酮葡萄糖苷和 木犀草素峰響應較低，可能與超聲提取不充分有 關。提取溶劑選擇方面，筆者分別考察了水飽和正丁醇和乙酸乙酯。結果顯示，水飽和正丁醇對毛蕊 異黃酮葡萄糖苷的提取效率較高，對木犀草素提取 效率較低。查閱2015年版《中國藥典》，水飽和正丁 醇為黃芪的提取溶劑，但考慮綜合提取效率，仍選 擇采用乙酸乙酯。