使用超聲清洗器對(duì)超高效液相色譜的分析

高血壓是常見(jiàn)的慢性疾病，也是心血管病最重要 的危險(xiǎn)因素，其導(dǎo)致的冠心病、腦卒中及慢性腎病等主 要并發(fā)癥給家庭和社會(huì)均造成沉重負(fù)擔(dān)。隨著社會(huì)和 經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，高血壓發(fā)病率呈逐年增加趨勢(shì)，已成為我 國(guó)目前重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題 。降壓類藥物起效快， 療效明確，應(yīng)用廣泛，但具有依賴性、停藥后反彈以及 長(zhǎng)期服用對(duì)肝腎的損害等不良反應(yīng) ，這使得輔助降 血壓類中成藥和保健食品普遍受到高血壓患者的青 睞。

Agilent 1290 Infinity II 超 高 效 液 相 色 譜 儀（配 有 G7120A 型二元泵，G7167B 型進(jìn)樣器，G7116B 型柱溫箱， G7114B 型檢測(cè)器），Agilent 6545 Q-TOF 質(zhì)譜儀（Agilent公司），METTLER TOLEDO XP-205 電子天平（METTLER TOLEDO 公司），KQ-800KDE 超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司），Milli-Q 超純水處理系統(tǒng)（Millipore 公司）。

鹽酸阿米洛利（批號(hào) 100310-200201）、鹽酸可樂(lè) 定（批號(hào) 071-8903）、氨苯蝶啶（批號(hào) 100429-200401）、 鹽酸地巴唑（批號(hào) 100420-200301）、酒石酸美托洛爾 （批號(hào) 100084-200101）、鹽酸特拉唑嗪（批號(hào) 100375- 200502）、鹽酸哌唑嗪（批號(hào) 100164-200402）、富馬酸 比索洛爾（批號(hào) 100711-200401）、鹽酸普萘洛爾（批 號(hào) 100783-200401）、鹽 酸 咪 達(dá) 普 利（批 號(hào) 100748- 200401）、鹽酸地爾硫（批號(hào) 100161-200503）、吲達(dá)帕 胺（批號(hào) 0257-9501）、苯磺酸氨氯地平（批號(hào) 100374- 200602）、鹽 酸 尼 卡 地 平（批 號(hào) 100586-200401）、厄 貝沙坦（批號(hào) 100607-200301）、鹽酸喹那普利（批號(hào) 100568-200401）、氯 沙 坦 鉀（批 號(hào) 100597-200501）、 利 血 平（批 號(hào) 0041-9509）、硝 苯 地 平（批 號(hào) 100338- 200502）、纈沙坦（批號(hào) 100651-200401）、鹽酸氟桂利 嗪（批 號(hào) 100844-200501）、尼 群 地 平（批 號(hào) 100585- 200501）、尼 莫 地 平（批 號(hào) 100270-200002）、非 洛 地 平（批 號(hào) 100717-2005-01）、拉 西 地 平（批 號(hào) 100741- 200501）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。

乙腈（批號(hào) 177795）、甲醇（批號(hào) 175167）、甲酸（批 號(hào) 168642）均為色譜純，購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有 限公司。質(zhì)譜所用調(diào)諧液、參比液均購(gòu)自 Agilent 公司。

市售輔助降血壓類保健食品10批（包括片劑3批口服液2批，顆粒劑1批，膠囊劑3批，軟膠囊1批），降壓 類中成藥5批（包括丸劑2批，膠囊劑1批，顆粒劑2批）。

對(duì)照品溶液　精密稱取對(duì)照品適量（精確至 0.01 mg），分別用甲醇配制成每 1 mL 各含 100 μg 的 對(duì)照品儲(chǔ)備液。取各對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，根據(jù)需要以 甲醇逐級(jí)稀釋，配制成混合對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度約 1~1 000 ng·mL-1，取 9 個(gè)濃度點(diǎn)分別為 1、5、10、50、 100、200、500、700、1 000 ng·mL-1）。片劑、丸劑、顆粒劑等固體制劑 研細(xì)后取樣；膠囊劑則將內(nèi)容物研細(xì)，并將膠囊殼剪 碎后取樣；粉末劑直接取樣：取上述樣品 1 次服用量， 精密稱定，置 100 mL 具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 50 mL，稱量，超聲（頻率 40 kHz，功率 800 W）提取 30 min 后放至室溫，用甲醇補(bǔ)足減失的量，用 0.22 μm 濾膜過(guò)濾，即得。口服液等液體制劑：精密量取制劑 10 mL，置 50 mL 量瓶中，加入甲醇 30 mL，超聲（頻 率 40 kHz，功率 800 W）提取 30 min 后放至室溫，以甲醇定容至刻度，用 0.22 μm 濾膜過(guò)濾，即得。離子源：電噴霧離子源（ESI）；采 集模式：正離子模式；掃描范圍：m/z 100~1 700。離 子源參數(shù)：霧化氣（N2）壓力 310 kPa；干燥氣（N2） 溫度 320 ℃，流速 8 mL·min-1；鞘氣（N2）溫度 400 ℃，流速 11 mL·min-1；毛細(xì)管電壓：4 000 V；碎裂電 壓：140 V；錐孔電壓：65 V；二級(jí)譜碰撞誘導(dǎo)裂解電 壓（collision-induced dissociation，CID）5~40 eV。 選 擇參比離子 m/z 121.050 9、m/z 922.009 8 實(shí)時(shí)校正。

液質(zhì)聯(lián)用的流動(dòng)相既要能夠達(dá)到分離的效果， 更為重要的是要保證待測(cè)化合物離子化的效率，以滿 足質(zhì)譜的檢測(cè)。根據(jù)待測(cè)降壓類化合物的結(jié)構(gòu)特征， 選擇正離子采集模式。實(shí)驗(yàn)中考察了甲醇 - 水、乙 腈 - 水、甲 醇 -0.1% 甲 酸 水 溶 液、乙 腈 -0.1% 甲 酸 水 溶 液、甲 醇 -5 mmol·L-1 甲 酸 銨 水 溶 液、乙 腈 - 5 mmol·L-1 甲酸銨水溶液等流動(dòng)相組成對(duì)分離效果 及質(zhì)譜相應(yīng)的影響。結(jié)果表明乙腈 -0.1% 甲酸水溶 液作為流動(dòng)相各降壓類化合物峰形及分離度相對(duì)較好，質(zhì)譜響應(yīng)信號(hào)最強(qiáng)，故最終選擇乙腈 -0.1% 甲酸 水溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。 毛細(xì)管電壓和離子化電壓均為能夠影響目標(biāo)化 合物檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵參數(shù)，經(jīng)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化，毛細(xì)管電 壓為 4 000 V 及離子化電壓為 140 V 時(shí)，各目標(biāo)降壓 類化合物準(zhǔn)分子離子峰響應(yīng)較好。并且為獲取降壓 類化合物更多碎片離子信息，采用 10~40 eV 的碰撞 能量范圍對(duì)各化合物的最佳碰撞能量進(jìn)行優(yōu)化。某些不法商家會(huì)將化學(xué)藥物涂于膠囊殼上或添 加至膠囊殼中，以達(dá)到添加的隱蔽性，所以對(duì)膠囊類保健食品和中成藥的膠囊殼的檢測(cè)也很重要。測(cè)定 時(shí)，將一次服用量的內(nèi)容物取出后，需將相應(yīng)的膠囊 殼剪碎并與內(nèi)容物一同進(jìn)行前處理。