數(shù)控浴式超聲儀得細(xì)胞生物學(xué)改變使用

材料與方法

CKX41 倒置熒光顯微鏡（Olympus）； VICTOR X5 型 酶標(biāo)儀（Biotek 公司）；KQ?100DE 型 數(shù)控浴式超聲儀（江蘇省昆山市超聲儀器有限公司）；1?15K冷凍臺(tái)式離心機(jī)（德國Sigma公司）；流式 細(xì)胞儀FACS VantageTM（美國Becton Dickinson公司）。將細(xì)胞以每孔 5 × 103 個(gè)的密 度，接種于 96 孔板中，37 ℃、5% CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng) 24 h 后，加入含不同濃度雌激素（0、0.5、1、5、10、 100 nmol/L）培養(yǎng)基，每組設(shè) 5 個(gè)復(fù)孔。繼續(xù)培養(yǎng) 24 h 后，棄舊培養(yǎng)基，每孔加入 10 μL 5 mg/mL 的 MTT 溶液和100 μL無血清DMEM/F12培養(yǎng)基，培養(yǎng) 箱中孵育 4 h。

結(jié)果

使用不同濃度 的雌激素處理 MCF?10A 和 MCF?12A 細(xì)胞 24 h，結(jié) 果顯示，0 ~ 10 nmol/L 的雌激素濃度可以促進(jìn)細(xì)胞 的增殖，并且 5 nmol/L 為最佳促進(jìn)濃度。 與空白組相比較，雌激素組中細(xì)胞的活性顯著高，同時(shí) 8?OHdG 和 LDH 水平明顯上升，即細(xì)胞毒性和 DNA 氧化損傷增高，但細(xì) 胞凋亡水平反而降低，差異均有統(tǒng)計(jì) 學(xué)意義（P < 0.01）。另外氧化應(yīng)激是 DNA 損 傷的重要原因之一。而氧化酶能抑制氧化應(yīng)激 清除產(chǎn)生的 ROS，保護(hù)細(xì)胞免受損傷。Nrf2 作 為細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)控因子，調(diào)控 HO?1 和 NQO1 等氧化酶的表達(dá)，維持氧化還原穩(wěn)態(tài)，消除致癌物質(zhì)。本研究結(jié)果顯示，雌激素可以 刺激 MCF?10A 和 MCF?12A 細(xì)胞增殖，并且在一定 濃度范圍內(nèi)隨濃度增加，增殖效果越明顯。同時(shí) 雌激素能增強(qiáng)正常乳腺細(xì)胞遷移和克隆能力，降 低細(xì)胞凋亡水平，與 YAN 等的研究結(jié)果相一致。 ANWESHA 等通過雌激素誘導(dǎo)細(xì)胞后發(fā)現(xiàn) 8? OHdG 的表達(dá)水平明顯增高，確定雌激素可誘導(dǎo) DNA 的氧化損傷，本實(shí)驗(yàn)研究也有相一致的結(jié) 果。研究結(jié)果進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，雌激素能夠促進(jìn) ROS 在胞內(nèi)積累和抑制 SOD、GPX、CAT 和 TAC 等氧化 酶的活性，并調(diào)控 Nrf2 及其下游 HO?1 和 NQO1 的 表達(dá)，引起氧化應(yīng)激，誘導(dǎo)細(xì)胞 DNA 的氧化損傷。

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