檢測紅棗中４種鏈格孢霉毒素（KQ-600DE使用）

鏈格孢菌是在自然界中廣泛分布的一種常見植 物病原真菌和腐生真菌，它會破壞農作物，導致采后 腐爛。貯藏期間水果蔬菜的大量腐爛與鏈格孢菌在 低溫下生長良好有關，許多蔬菜水果很容易產生鏈 格孢菌。目前關于鏈格孢菌毒素檢測的標準，只 有ＳＮ／Ｔ４２５９－２０１５《出口水果蔬菜中鏈格孢菌毒素 的測定液相色譜－質譜／質譜法》標準，且鏈格孢菌 毒素的檢出 限 為１０μｇ／ｋｇ。而關于鏈格孢菌毒素 的限量規定則未見報道。

１ 實驗部分 

１．１ 試劑與儀器 

乙腈、甲 醇 （ＨＰＬＣ 純），美 國 Ｆｉｓｈｅｒ公 司；甲 酸、ＮａＣｌ（ＨＰＬＣ純），德國 ＣＮＷ 公司；十八烷基三 氯硅烷（Ｃ１８）吸 附 劑 （４０～６３μｍ），德 國 ＣＮＷ 公 司；Ｎ－丙基乙二胺（ＰＳＡ）吸附劑（４０～６３μｍ），德國 ＣＮＷ 公司；石 墨 化 碳 墨 （ＧＣＢ）吸 附 劑 （３８～１２５ μｍ），德國 ＣＮＷ 公 司；騰 毒 素（Ｔｅｎ）、鏈 格 孢 霉 素（ＡＬＴ）、鏈 格 孢 酚 甲 基 乙 醚 （ＡＭＥ）、鏈 格 孢 酚 （ＡＯＨ）４種 ＡＴｓ標準品（質量分數＞９９．５％），德 國 Ｄｒ．Ｅ公司；紅棗樣品（來源于新疆地區不同生產 基地、農貿市 場 和 超 市），樣 品 去 果 核 后，經 勻 漿 后 －１８ ℃冷凍保存備用。 ＷａｔｅｒｓＸＥＶＯＴＱ－Ｓ超 高 效 液 相 色 譜－串 聯 質 譜儀，美國 Ｗａｔｅｒｓ公司；ＭＳ３－ｂａｓｉｃ型漩渦混合器， 德國ＩＫＡ 公司；Ｓｉｇｍａ３－３０ｋ型離心機，德國 Ｓｉｇｍａ 公司；Ｎ－ＥＶＡＰＴＭ１１２ 型 氮 吹 儀，美 國 Ｏｒｇａｎｏｍａ－ ｔｉｏｎ公司；昆山舒美KQ-600DE 型 超 聲 波 清 洗 器，江 蘇 昆 山 市超聲儀器公司；ＵＬＰＨＷ－ＩＶ 型超純水機，四川優 普超純科技有限公司。 

１．２ 實驗 

１．２．１ 標準溶液的配制

 分別稱取２ｍｇ鏈 格 孢 酚 甲 基 乙 醚 （ＡＭＥ）、１ ｍｇ騰毒 素（Ｔｅｎ）、０．５ ｍｇ 鏈 格 孢 霉 素 （ＡＬＴ）、１０ ｍｇ鏈格孢酚（ＡＯＨ）４種 ＡＴｓ標準品，用乙腈配成 各１０ ｍＬ 質 量 濃 度 分 別 為 ２００ ｍｇ／Ｌ ＡＭＥ、１００ ｍｇ／ＬＴｅｎ、５０ｍｇ／ＬＡＬＴ、１０００ｍｇ／ＬＡＯＨ 的單 個 標 準 儲 備 液，－１８ ℃ 保 存。 分 別 取 ０．５ ｍＬ ＡＭＥ、１ｍＬＴｅｎ、２ｍＬＡＬＴ、０．１ｍＬＡＯＨ 的單個 標準儲備液，用乙腈定容至１０ｍＬ，配制成質量濃度 為１０ｍｇ／Ｌ的混合標準液。 

１．２．２ 超高效液相色譜－串聯質譜法（ＵＰＬＣ－ＭＳ／ ＭＳ）檢測條件

ＬＣ條件：ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣＢＥＨ Ｃ１８ 色譜柱（１００ｍｍ×２．１ｍｍ，１．７μｍ）；流動相：體積分數為 ０．１％甲酸水溶液∶Ｂ 乙腈。梯度洗脫程序：０．０～ ０．５０ｍｉｎ（體 積 分 數 為 ９５％ 甲 酸 水 溶 液），０．５０～ ５．００ｍｉｎ （體 積 分 數 為 ９５％ ～５％ 甲 酸 水 溶 液）， ５．００ｍｉｎ （體 積 分 數 為９５％甲 酸 水 溶 液）；流 速 為 ０．４ｍＬ／ｍｉｎ；柱溫箱為３０ ℃；進樣體積為５μＬ。 ＭＳ條件：電 噴 霧 離 子 源（ＥＳＩ），正 離 子 和 多 反 應監測（ＭＲＭ）模式，離子源溫度為１５０ ℃，脫溶劑 氣流速為８００Ｌ／ｈ，錐孔氣流速為５０Ｌ／ｈ，氬氣作為 碰撞氣，４種 ＡＴｓ的監測離子對及錐孔電壓等質譜 參數見表１。

２ 結果與分析

定容溶劑是影響質譜分析過程中目標分析物離 子化效率和峰形的重要因素之一。結合分析物的結 構性質和流動相體系特點，本實驗選取水和乙腈作 為定容溶劑，考察了不同水和乙腈體積比作為定容 溶劑對４種 ＡＴｓ響應和峰形的影響。當水和乙腈體積 比 為 ６０∶４０ 時，ＡＭＥ 和 ＡＯＨ 組分在質譜上沒有響應；當水和乙 腈體積比為４０∶６０時，Ｔｅｎ、ＡＬＴ、ＡＭＥ和 ＡＯＨ４ 種 ＡＴｓ峰型對稱性差，且均出現峰前 伸 的 現 象；當水和 乙 腈 體 積 比 為５０∶５０時，４種 ＡＴｓ 峰型對稱性好，且 響 應 較 高。而 ＧＣＢ 吸 附 劑 對 ＡＭＥ 和 ＡＯＨ 組分有較強吸附作用，回收率相對較差 （低于４０％）。通 過 比 較 Ｃ１８和 ＰＳＡ 吸 附 劑 對４種 ＡＴｓ的凈化效率發現，當吸附劑用量為１５０ｍｇ時， 兩種吸 附 劑 對 Ｔｅｎ、ＡＬＴ 和 ＡＭＥ 的 回 收 率 均 在 ８０％以上，而 對 于 ＡＯＨ 組 分 的 凈 化 效 果，Ｃ１８吸 附 劑要明顯高于 ＰＳＡ 吸附劑。因此本實驗選取 Ｃ１８用 量為１５０ｍｇ作為凈化條件。

３ 結論 

建立了同時測定紅棗中 Ｔｅｎ、ＡＯＨ、ＡＭＥ 和 ＡＬＴ４種 ＡＴｓ超 高 效 液 相 色 譜－串聯質譜分析方 法。紅棗樣品經甲酸乙腈提取，ＱｕＥＣｈＥＲＳ方法凈 化，采用 ＢＥＨ Ｃ１８色 譜 柱 分 離，體 積 分 數 為０．１％ 甲酸－水和乙腈作為流動相梯度洗脫，４種 ＡＴｓ有較 好的響應和峰形。同時，通過基質匹配外標法定量， 有效地減少了基質效應，提高了定量的準確性。經 方法學驗證，表明該方法的線性范圍、檢出限、定量 限、準確度和精密度等均滿足殘留檢測方法確認的 要求，適用于紅棗中４種 ＡＴｓ的定性定量檢測。

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