和刺激誘導(dǎo)大鼠的抗抑郁作用

抑郁癥是一種以情緒持續(xù)低落超過兩周、思維 和行為發(fā)生改變?yōu)橹饕卣鳎瑖?yán)重影響正常生活的 精神疾病。雖然現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)抑郁癥有廣泛深入的 研究，但其具體的病因和發(fā)病機(jī)制仍不明確。近年 來有學(xué)者提出了“神經(jīng)營養(yǎng)假說”，認(rèn)為抑郁癥的發(fā) 生與腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）及其信號(hào)通路 密切相關(guān)。當(dāng)前抗抑郁的藥物大部分是合成藥， 普遍存在起效慢、有效率不高、價(jià)格昂貴、不良反 應(yīng)多等缺點(diǎn)，制約了臨床使用。因此安全、低毒的 天然藥物成了抗抑郁藥研究領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Sprague-Dawley（SD）大鼠，清潔級(jí)，雄性， 50 只，180～220 g，由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供， 合格證號(hào)為 SCXK（浙）2014-0001。

1.2 藥物與試劑

吳茱萸次堿，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 98%，購自杭州東岸生 物醫(yī)藥有限公司；氟西汀片，規(guī)格 10 mg/片，產(chǎn)品批 號(hào) 171201，購自常州四藥制藥有限公司；羥甲基纖維 素鈉，產(chǎn)品批號(hào) 950420，購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限 公司；5-羥色胺（5-HT）和去甲腎上腺素（NA）酶聯(lián) 免疫吸附測定試劑盒，產(chǎn)品批號(hào) AK0017NOV25019， 購自 Elabscience 公司；PCR 引物購自上海捷瑞生物 工程有限公司；qPCR 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，產(chǎn)品批號(hào) RR036A，購自寶生物工程（大連）有限公司。

1.3 儀器

分析天平由上海民僑精密儀器公司提供；酶標(biāo) 儀由 Thermo Fisher 提供；恒溫水浴超聲儀由昆山超聲儀有限公司提供。

2 方法

2.1 分組及給藥

實(shí)驗(yàn)開始前大鼠在實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，以適應(yīng)環(huán)境。適應(yīng)性飼養(yǎng)結(jié)束后大鼠進(jìn)行曠場實(shí)驗(yàn) （open-field test），根據(jù)得分將 50 只大鼠隨機(jī)分為 5 組：對(duì)照組、模型組（0.5% CMC-Na 溶液）、吳茱 萸次堿低劑量組（10 mg/kg）、吳茱萸次堿高劑量組 （20 mg/kg）、氟西汀組（1 mg/kg）。吳茱萸次堿 的劑量是通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定的；氟西汀劑量根據(jù)人的 劑量換算成大鼠的劑量，文獻(xiàn)顯示一般人的劑量是 20 mg/d（按 70 kg/人，200 g/鼠），人鼠換算系數(shù)為 0.018，算得鼠的劑量為 1.8 mg/kg，前期按這個(gè)劑 量做了預(yù)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)連續(xù)給藥 2～4 周后鼠的耐受性 較差，故調(diào)整為 1 mg/kg 給藥。除對(duì)照組外，模型 組及各給藥組于造模的第 15 天開始，每天一次 ig 給藥，完成后 1 h，繼續(xù)進(jìn)行慢性不可預(yù)見性刺激抑 郁造模刺激，連續(xù) 14 d 直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。室溫（22± 2）℃，大鼠自由攝食飲水，光照節(jié)律為 12 h（8:00～ 20:00）。

2.2 大鼠慢性不可預(yù)見性刺激抑郁模型的建立

參照文獻(xiàn)的方法加以改進(jìn)，建立大鼠抑郁模 型：大鼠在 28 d 實(shí)驗(yàn)期內(nèi)接受 7 種不同的刺激，分 別為：禁食（24 h），禁水（24 h），夾尾（1 min）， 鼠籠搖晃（5 min），潮濕飼養(yǎng)（12 h），冰水游泳（5 min）， 晝夜顛倒。每天一種刺激，同種刺激不連續(xù)出現(xiàn)。

2.3 體質(zhì)量檢測

分別于造模第 1、14、28 天稱取大鼠體質(zhì)量。

2.4 糖水偏好實(shí)驗(yàn)

糖水消耗實(shí)驗(yàn)在模型組造模兩周后（第 14 天） 和給藥兩周后（第 28 天）進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)開始前先訓(xùn)練 大鼠飲用 1%糖水 24 h，然后再給予蒸餾水 24 h， 訓(xùn)練期間正常飲食。訓(xùn)練結(jié)束后禁食禁水 12 h，同 時(shí)給予大鼠 1%糖水一瓶和蒸餾水一瓶，24 h 后稱 量記錄糖水消耗量和蒸餾水消耗量。 糖水偏好度＝糖水消耗量/（糖水消耗量＋蒸餾水消 耗量）

2.5 曠場實(shí)驗(yàn)曠場

實(shí)驗(yàn)在模型組造模兩周后（第 14 天）和給 藥兩周后（第 28 天）進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)室曠場箱為高 100 cm， 寬 100 cm，高 40 cm 的木質(zhì)箱，底面為黑色，四周 為白色，通過 Anymaze 視頻追蹤軟件將底面劃分為 25 個(gè)小方格。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行時(shí)室內(nèi)保持安靜，將大鼠緩 慢放至中央格，觀察并記錄 5 min 內(nèi)大鼠穿越的格 數(shù)和中央格停留時(shí)間。每只大鼠實(shí)驗(yàn)過后將木箱底 部清理干凈，并用酒精棉擦拭底部，以保證下只大 鼠實(shí)驗(yàn)時(shí)不受糞便氣味等因素的影響。

3 結(jié)果

3.1 吳茱萸次堿對(duì)大鼠體質(zhì)量的影響

體質(zhì)量變化能夠反映抑郁模型建立是否成功。 第 14 天應(yīng)激刺激后，對(duì)照組大鼠體質(zhì)量增長較快， 與模型組相比有顯著性差異（P＜0.05），表明建模 成功。與模型組比較，在第 28 天，氟西汀組和吳茱 萸次堿高低劑量組均能顯著抑制大鼠體質(zhì)量下降 （P＜0.05），吳茱萸次堿高劑量組與氟西汀組沒有顯 著性差異，說明吳茱萸次堿能夠改善抑郁大鼠的食 欲，增加進(jìn)食量，保持體質(zhì)量增長，改善抑郁癥狀。

3.2 吳茱萸次堿對(duì)大鼠糖水偏好度的影響

與對(duì)照組比較，在第 14 天，模型組大鼠的糖水 偏好度明顯降低（P＜0.05）。與模型組比較，在第28 天，氟西汀組和吳茱萸次堿高劑量組大鼠的糖水 偏好度明顯增加（P＜0.05），吳茱萸次堿高劑量組 與氟西汀組沒有顯著性差異。

3.3 吳茱萸次堿對(duì)大鼠在曠場實(shí)驗(yàn)中行為的影響

與對(duì)照組比較，在第 14 天，模型組大鼠穿越格 數(shù)和中央格停留時(shí)間明顯減少（P＜0.05）。與模型 組比較，在第 28 天，氟西汀組和吳茱萸次堿高劑量 組大鼠穿越格數(shù)和中央格停留時(shí)間明顯增加（P＜ 0.05），吳茱萸次堿高劑量組與氟西汀組沒有顯著性 差異。

4 討論

昆山舒美認(rèn)為目前，抑郁癥模型可以分為環(huán)境刺激模型、社 會(huì)刺激模型、藥物誘導(dǎo)模型、轉(zhuǎn)基因模型、手術(shù)制 備模型和產(chǎn)后抑郁模型 6 大類。本研究所選取的模型就屬于環(huán)境刺激模型，是抑郁癥的經(jīng)典慢性模型 之一，利用長期的相對(duì)溫和的不可預(yù)測的人為刺激 使動(dòng)物產(chǎn)生抑郁樣行為，其病因和病理機(jī)制接近于 人類抑郁癥，目前已經(jīng)被廣泛接受并運(yùn)用于抗抑郁 藥物研究。本實(shí)驗(yàn)通過檢測大鼠體質(zhì)量、蔗糖 偏愛度和曠場實(shí)驗(yàn)等，判斷慢性應(yīng)激抑郁模型建立 成功與否，觀察吳茱萸次堿對(duì)大鼠抑郁行為的影響。 結(jié)果表明吳茱萸次堿能明顯改善大鼠抑郁樣行為， 高劑量（20 mg/kg）效果較好，與陽性藥氟西汀的作用相當(dāng)。



 

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